RNA提取产品选择指南
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本文针对艾德莱生物RNA提取产品选择指南(仅供参考)
首先询问客户提取的大致种类,是动物组织细胞?植物?血液样品?真菌?细菌?病毒?酵母?不同的种类应该选择不同的产品。
动物组织细胞
(1) RN01 TRIpure reagent,这个就是Invitrogen的TRIzol,我们质量完全和进口一样可以100%替代进口TRIzol。
(2) RN04 总RNA提取试剂盒。这款就是TRIzol,只是把TRIzol配套使用的氯仿,异丙醇,70%乙醇,DEPC处理的水和配全了。等于是TRIpure(RN01)加氯仿,异丙醇,70%乙醇,DEPC处理的水。
(3) RN03 RNApure 超纯总RNA快速提取试剂盒。这个等于是TRIzol加离心柱子,在TRIzol的基础上加了离心柱子,速度更快,纯度更高,操作更简单。等于是TRIpure(RN01)加离心柱子。
(4) RN07 EASYspin组织/细胞RNA快速提取试剂盒。这款等于是Qiagen的74104完全一样,它的优点在于不用苯酚,氯仿等毒性物质,速度最快,但是残留DNA可能稍多,必要时候还可能要用DNA酶消化。
(5) RN28 EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂盒。这款等于是Qiagen的74134完全一样,是目前世界上最先进的试剂盒。15分钟提取,不用苯酚,氯仿,也不残留DNA,不用DNA酶消化直接可以做荧光定量PCR,唯一缺点,就是好货不算便宜。
总结:首先推荐就是RN03 RNApure 超纯总RNA快速提取试剂盒或者RN28 EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂盒这两款产品。其它的随机应变。
根据客户需要来,客户觉得RN28贵,就推RN03,还觉得贵,就推RN01,就是想替换invitrogen的TRIzol,就推RN01,还想TRIzol的基础上用离心柱子,更快更好,就推RN03,想替换Qiagen的74104,就推RN07,也可以建议我们有升级版本的Qiagen的74104,就是等于Qiagen的74134的更好的RN28,如果嫌RN28贵,就还是用RN07替换74104,但是一般能用Qiagen的客户,肯定能用得起更好的,就推荐RN28,这款等于Qiagen的74134,是目前最好的。
植物
植物千变万化,种类繁多,非常复杂,世界上任何一家公司任何一种试剂盒也无法确保100%提取成功。因此选择推荐植物RNA提取试剂盒必须多和客户,技术人员沟通。
A: TRIzol可以提取的植物样品
首先询问客户的样品是否曾经用别的试剂或者试剂盒提取过的植物样品,TRIzol是否可以提取成功?如果TRIzol可以提取成功的样品:
(1) 首先有两种选择:第一是用我们的RN01 TRIpure reagent,这个就是Invitrogen的TRIzol,我们质量完全和进口一样可以100%替代进口TRIzol。第二是用RN33 PLANTpure 通用植物总RNA快速提取试剂盒(普通植物组织细胞),这个试剂盒的原理,成分和RN03完全一样,也是TRIzol加离心柱子,在TRIzol的基础上加了离心柱子,速度更快,纯度更高,操作更简单。等于是TRIpure(RN01)加离心柱子。
(2) 然后根据客户的特殊具体需求比如想速度更快,操作更简单,还不想用TRIzol这种苯酚,氯仿毒性物质的客户还有两种选择:一种选择是RN09 EASYspin植物RNA提取试剂盒,这个盒子和Qiagen的74904完全一样,不用苯酚,氯仿,速度最快,操作最简单。但是对部分植物样品来说,可能残留基因组DNA稍多,只有做了试验才知道客户的样品是不是残留DNA稍多,就是Qiagen也不能确保100%的样品没有残留DNA。我们能确保的就是和Qiagen的效果一致。
实在有DNA残留的,就可能还要用DNA酶消化。具体只能让客户自己权衡选择或者和艾德莱技术人员沟通了再选择。另一种就是RN38 EASYspin Plus植物RNA提取试剂盒这个试剂盒是RN09的改进版本(Qiagen也没有这款,是艾德莱在Qiagen基础上改进世界首创的),它使用基因组清除柱子的技术和配方在保持RN09不用苯酚,氯仿毒性物质,最简单,最快速的基础上消除了基因组DNA残留,一般肉眼不可见DNA残留。
注意:目前在我们测试的几种植物样品中均已经获得成功,使用RN09提取有残留DNA的样品种类使用这款后,均无DNA残留。但是,植物千变万化,我们还是不能给客户做100%保证(世界上也没有公司可以保证,我们已经是最好的)。让客户自己权衡或者找艾德莱技术支持沟通后再选择。
B: TRIzol无法提取的植物样品
如果客户说,他们曾经用过TRIzol,但是TRIzol无法提取成功,或者没有用过TRIzol,但是知道TRIzol无法提取成功的样品,那么RN01,和RN33是肯定不行了。别无选择只有两个可能推荐:RN09和RN38,具体又分两种情况:
(1) 叶片、花瓣、花芽类比较叶片类的种类包括象葡萄叶子,杨树叶子类代谢产物多酚丰富的种类:叶片、花瓣类目前成功率基本为100%,这种情况推荐RN09,或者RN38都可以。客户特别在意不要有DNA污染,用于做反转录荧光定量的可以推荐RN38尝试。
(2) 如稻谷种子,百合鳞茎,葡萄果实,唐菖蒲的球茎等淀粉含量特别大,特别干种子一类:这一类很难提取,失败率高我们不能确保成功,只能客户根据需要尝试,不能确保成功。必须找艾德莱技术支持沟通再选择。
总结:植物千变万化,如果TRIzol可以提取的种类,我们100%的确保我们RN01和RN33一定可以提取。想要更快速简单,无毒性物质的,可以尝试RN09和RN38。但是如果碰到TRIzol不能提取的种类,只能尝试RN09和RN38,我们绝对不能告诉客户100%能成功。
尤其是淀粉含量特别丰富的土豆,块茎,稻谷种子,干种子之类的样品,失败率还是很高的。必须多和艾德莱技术人员沟通。我们能100%保证的就是RN09和RN38,一定只比Qiagen的同类产品74904好,Qiagen的74904能提取出来的样品种类,我们不能提取的,退货再赔偿1000元。这个可以和客户保证。(这还是我们保守的说法,因为象Qiagen 74904不能提取的冬青树,虎仗,黑加仑很多样品,我们RN09,RN38都可以提取,实际上RN09就是改进版的Qiagen的74904)
客户部分成功样品列表(还在不断增长中):棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、仙人掌、报春花、水稻、玉米、唐菖蒲、樱桃、白玉兰、毛白杨、樱花、葡萄、百合花、紫菜、绿藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、苹果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苎麻、榛子。
真菌样品
选择是RN09 EASYspin植物RNA提取试剂盒,没错,真菌就是用RN09植物RNA提取的盒子来提取的。这个盒子RN09和Qiagen的74904 RNeasy plant mini kit完全一样。客户要搞不清楚就下原版qiagen的说明书看看就行了,确保RN09和Qiagen的74904一样。
RNeasy Plant Mini Kit
从植物和真菌中纯化多达100 ug总RNA
30分钟即可获得高品质的总RNA
无需酚/氯仿抽提
无需氯化铯梯度离心,无需氯化锂或乙醇沉淀
出色的RNA回收率
即用型RNA适合各种下游应用
血液样品
A: 无保护直接冻存血液(血液RNA保存的时候,一定要先处理了才保存,直接把抗凝血液冻到负80冰箱,RNA肯定降解,至少部分降解。)
提取冻存的血液RNA的时候,你没有太多选择,只有选择RN23 RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒,因为你不可以先融解冻血,然后再裂解红细胞,因为细胞冰冻后已经受损破裂,RNA酶释放出来了,这个时候,不能裂解红细胞再去折腾了,必须使用可以直接裂解全血的裂解液,乘RNA酶还没有完全降解RNA的时候,就抑制住RNA酶,然后往下面提取。
B: 新鲜的血液
(3) 可以选择RN25 RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒,这个原理就是先红细胞裂解液裂解红细胞得到白细胞,然后Trizol(TRIpure)裂解白细胞,最后离心柱子漂洗。
(4) 也可以用RN23 RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒。
(5) RN06 EASYspin 全血RNA快速提取,这款和Qiagen的qiaamp blood RNA KIT一样,优点是不用苯酚,氯仿(trizol)毒性物质。缺点是残留DNA多,还要加DNA酶消化,如果RNA做荧光定量PCR,不推荐这款。
(6) 最后,你经费特别紧张,也可以选择RN23的不用离心柱的版本。RN02 TRIpure LS Reagent,LS就是liquid sample的意思,液体样品RNA提取试剂,就是专门提取液体样品的TRIzol版本。这个缺点就是不用离心柱子纯度差一点(当然一般不影响试验结果),繁琐一点,对操作技术的要求高一点,样品量太小也不适合。
总结:如果是新鲜血样品,首先推荐RN25 RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒或者RN23 RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒;如果你是冰冻血,别无选择,只有推荐RN23 RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒;需要处理,运输,保存血液样品后再提取也是推荐RN23 RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒。
酵母样品
RN10 EASYspin酵母RNA快速提取试剂盒,不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单。
细菌样品
RN08 EASYspin酵母RNA快速提取试剂盒,不用苯酚,氯仿毒性物质,快速简单。
病毒样品(从血浆,血清,体液等无细胞体系)
RN27 病毒RNA快速提取试剂盒
从同一个样品里面同时提取RNA、DNA
RN29 ALLprep 组织细胞RNA/DNA分提试剂盒。这个等于是Qiagen的80204 AllPrep DNA/RNA Mini Kit完全一样。
从同一个样品里面同时提取RNA、DNA、protein蛋白
RN36 ALLprep 组织细胞RNA/DNA/Protein分提试剂盒。这个等于是Qiagen的80004 AllPrep DNA/RNA/protein Mini Kit完全一样。
总结:任何从一个样品里面同时提取RNA,DNA,蛋白或者任意组合的客户都可以做。