幽门螺杆菌的临床与实验研究
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幽门螺杆菌的临床与实验研究
从Warren和Marshall在1983年报道从慢性活动性胃炎病人胃粘膜中成功地培养出螺旋形细菌以来，来自澳大利亚、英国、荷兰及我国不少研究结果均表明，该菌与慢性胃淡及消化性溃疡有密切关系，该菌为幽门螺杆菌（Helicobacter pylorides，简称Hp）。为了进一步研究Hp的致病性、分布及来源，我们对1000例内镜检查患者进行Hp微生物学及组织病理学检查，并对5只成年狗、10只分健康小白鼠及10只大白鼠进行有关Hp的实验研究，旨在评估人与其它动物胃粘膜中Hp阳性率、临率意义及与慢性胃病的关系。
1 材料和方法
1.1 临床研究
本研究对象为有化道症状进行内镜检查的1027例住院及门诊患者，经筛选后对1000例资料完整病例进行了统计，其中，男709例，女291例，年龄12岁～82岁，平均47.2岁，内镜或病理最后诊断为慢性浅表性胃炎518例，慢性萎缩性胃炎174例， 胃溃疡 56例、胃癌47例，胃息肉12例，十二指肠溃疡121例，十二指肠炎38例，食管炎28例，食管癌6例。病人禁食12h，清晨空腹按常规准备后进行内镜检查，内镜用洗必泰和乙醇消毒，活检钳用同样方法处理，每个病人除在病变部位活检外，均在胃窦距幽门2cm范围内取2～3个活检标本，分为两份，一份作细菌培养和双相快速诊断，另一份作组织病理学检查。
组织学检查 活检标本在10％甲醛溶液中固定，然后按常规步骤制做病理切片。所有活检病理切片均做苏木－伊红（HE）染色，126例同时做Warthin－Starth染色，部分病例还做了革兰染色及电镜观察，发现Hp者为阳性，否则为阴性。
微生物学检查 取新鲜标本一块，先在Hp选择性血脂平板涂抹，然后将该标本插入尿素酶快速诊断培养皿中，观察其反应，阳性者一般3min～15min即可在组织块周围出现红色反应环、反应环出现的快慢与大小和组织块内含菌量的多少成正比。尿素酶试验后，将原组织块取出放在作氧化酶测试的滤纸片上，3min～15min内组织粘膜部分变黑色者为阳性，表示有Hp存在，否则为阴性。组织块变黑的快慢也与Hp量成正比。我们称之为“双快试验”，Hp对双快试验均成阳性反应（双相阳性），有变形污染者尿素酶试验可呈阳性，而氧化酶试验阴性，假单胞菌属污染则尿素酶试验阴性，而氧化酶试验阳性，反以“双快试验”对Hp感染诊断有极重要的鉴别意义。用作细菌培养的平板置37℃微嗜氧环境或CO 2 环境中培养3d～4d。细菌生长后，对菌落特征、生化反应、形态学研究及多种抗生素、中药的药敏试验等项指标进行观察。
1.2 动物实验
取5只成年健康狗，用硫苯妥钠静脉麻醉后进行纤维内镜观察，并从胃窦小弯距离门2cm取活检两块、胃体小弯活检两块、分别进行细菌学检查及病理组织学检查。活检之后，由活检孔道插塑料导管，向胃注入事先制作的新鲜纯Hp活菌液5ml（含菌数约为10 8 /ml）结束检查之后动物隔离饲养，于第二周再灌5ml，第3，4，5，6，7，8周各作内镜检查一次并活检，标本处理同前。取健康大白鼠10只，其中两只处死后取其全胃，于胃窦体各剪两块标本分别进行细菌学检查及病理组织学检查。其它大白鼠均用胃管向胃内注入纯Hp菌液1ml（含菌数同上）、第2周再灌1ml，于第3，4，5，7周各处死两只，取出胃标本进行细菌学及病理组织学检查，方法同前。取健康小白鼠10只，用与大白鼠同样的方法进行实验。
2 结果
2.1 临床研究
1000例各胃十二指肠疾病中微生物学不同方法的Hp检出率见表1。以十二指肠球部溃疡、十二指肠球炎及胃溃疡的检出率最高。快速诊断阳性而培养阴性者18例，快速诊断阴性而培养阳性者25例。一例尿素酶试验阳性而氧化酶鉴测为阴性，经细菌学鉴定为大量变形菌污染。126例病理组织学切片用不同染色方法的Hp检出率见表2，其中细菌学阳性、切片阴性者12例，细菌学阴性切片阳性者3例。有16例胃溃疡患者的胃标本同时取自胃窦距幽门2cm以内胃粘膜及 胃溃疡 组织，取自胃窦粘膜的标本中有10例Hp微生物学检查为阴性，取自溃疡组织的标本及2例阳性。10例胃癌患者胃窦粘膜标本中有6例Hp阳性，取自癌组织的标本无一例阳性，这表明Hp不易在溃疡及癌组织中存在。
表1 胃十二指肠疾患1000例Hp微生物学检出率
内镜诊断
尿素酶（％）
氧化酶（％）
培养（％）
浅表性胃炎
244/518（47.1）
243/518（46.9）
127/305（41.6）
萎缩性胃炎
72/174（41.4）
72/174（41.4）
72/158（45.6）
胃溃疡
41/56（73.2）
41/56（73.2）
38/55（69.1）
胃 癌
24/47（51.0）
24/47（51.0）
11/45（24.4）
胃息肉
5/12（41.7.0）
5/12（41.7.0）
2/5（40.0）
十二指肠溃疡
98/121（81.0）
98/121（81）
99/119（83.2）
十二肠炎
30/38（78.9）
30/38（78.9）
20/38（73.7）
食管癌
2/6（33.3）
2/6（33.3）
食管炎
14/28（50.0）
14/28（50.0）
14/23（60.9）
合 计
530/1000（53.0）
529/100（52.9）
391/748（52.3）
表2 胃活检标本126例切片Hp阳性结果比较
内镜及病理诊断
n
W－S染色
HE染色
慢性浅表性胃炎
47
22（46.8）
20（42.5）
慢性萎缩性胃炎
18
6（33.3）
5（27.8）
胃 溃 疡
16
10（62.5）
10（62.5）
胃 癌
10
6（60.0）
