肿瘤浸润淋巴细胞

 

二、肿瘤浸润淋巴细胞

1986年Rosenberg研究组首先报道了肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）。TIL细胞表型具有异质性，一般来说，TIL中绝大多数细胞CD3阳性。不同肿瘤来源的TIL细胞中，CD4+T细胞、CD8+T细胞的比例有差异，大多数情况下以CD8+T细胞为主。新鲜分离的TIL中CD25+细胞百分率较低，随着体外加IL-2培养时间的延长，CD25+细胞百分率逐渐升高。NK细胞的标记（CD16，CD56）在TIL体外加IL-2培养过程中有先增高后降低的趋势。

　　用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞，加入高剂量IL-2体外培养，残存的肿瘤细胞7-13天全部死亡。经IL-2活化的TIL与来自PBMC的LAK细胞比较，其特点是：（1）50-100倍，因此在治疗中可以减少效应细胞和IL-2的用量，而且对LAK治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治疗效果；（2）主要由CD8阳性细胞诱导而来，在动物实验中发现TIL杀伤肿瘤作用具有特异性；（3）宿主的抑制状态有利于TIL的杀伤作用，因此治疗时加用环磷酰胺（Cy）100mg/kg可明显提高疗效，可能与免疫抑 制药 能消除抑制性细胞或因子，增强过继免疫治疗作用有关，因而可减少IL-2的用量，降低毒副反应；（4）可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中获得淋巴细胞，经加IL-2培养后，其生长、扩增能力强于LAK细胞。已有报道应用TIL治疗14例转移性肺癌等晚期肿患者，其中4例肿瘤缩小50%以上，副作用明显低于IL-2/LAK疗法。

应用LAK或TIL细胞治疗肿瘤国内外进展都很快，今后发展的方向是：（1）提高LAK细胞的纯度，应用活化LAK细胞贴壁的特性，纯化粘附LAK（adherent-LAK,A-LAK）细胞。在IL-2诱导下数量可增加100倍，而且抗肿瘤转移的作用比LAK强20-50倍。（2）改变继承转移细胞在体内的分布，如改变注射细胞途径和方法，达到局部/区域继承免疫疗法的目的。（3）与其它细胞因子如IL-12、IFN、TNF-α和CSF联合治疗，增强LAK的杀伤活性，另有报道，抗CD3单抗与IL-2协同，能显著提高LAK细胞的数量和杀伤活性。应用CD3单抗诱导的杀伤细胞称为CD3抗体激活的杀伤细胞（CD3McAb activated killer cells,CD3AK），抗体含量在10-20ng/ml即可达到刺激杀伤活性的高峰，体外培养数天后即可出现明显的杀伤活性。CD3AK激活需要单核细胞存在，其增殖速度和细胞毒活性均高于LAK。所有的D3+CD8+T细胞和1-6%CD3+CD4+T细胞可诱导出CD3AK。CD3AK已开支应用于临床。（4）将某些细胞因子（如IL-2、TNF等）cDNA转染LAK或TIL用于基因治疗。

表7-14 影响LAK效应的因素及机理

影响因素 调节方式 效　　应 促进作用 抑制作用 细胞 单核-巨噬细胞 双向 T、NK产生IL-2，表达高亲和性IL-2r 产生PGE2，抑制IL-2产生，消炎痛（indomethacin）可解除Mφ抑制作用 肿瘤细胞 双向 肿瘤细胞及其提取物增强混合淋巴细胞肿瘤 细胞培养 和体外致敏的LAK活性 肿瘤细胞分泌的因子抑制LAK活性 中性粒细胞 负 产生超氧化阴离子（O ₂ -） 红细胞

正

　 分泌超氧化物歧化酶，抑制O ₂ -作用，促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和表达IL-2R 　 细胞因子 IL-1 正 IL-2、IFN-γ产生和IL-2R表达，增强LAK的ADCC效应 　 IL-3 正 + 　 IL-4 双向 +，多为小鼠实验系统 -，抑制IL-2诱导的LAK活性 IL-5 正 协同IL-2诱导LAK活性 　 IL-6 正 协同IL-2诱导LAK活性 　 IL-7 正 单独可诱导LAK活性 　 IL-12 正 协同IL-2诱导LAK活性 　 GM-CSF 正 促进Mφ分泌IL-1、TNF-α 　 TNF-α 正 与IL-2有协同作用，LAK分泌 　 　 　 TNF-α直接作用 　 IFN-γ 双向 促进LAK分化 可通过单核-巨噬细胞分泌PGE2抑制LAK活性 IFN-β 负 抑制细胞因子产生和受体 抑制细胞因子产生和受体表达 LR 正 促进LAK杀伤活性 　 抗体 抗肿瘤细胞 正 促进LAK的ADCC 　 抗CD3 正 与IL-2联合应用，促进LAK活性，增加LAK数量 　 抗Tac，抗TfR 负 　 封闭细胞表面结构 抗IFA-1 负 　 抑制效应细胞-靶细胞粘附 抗LAK-1 负 　 　 双特异性抗体 正 抗肿瘤和CD3McAb重构的双特异性抗体 　 多糖激素神经肽 蘑菇多糖、 黄芪 正 　 　 去甲肾上腺素 正 激活PKC 　 生长抑素 正 抑制腺苷酸环化酶 　 糖皮质激素 负 　 - PGE2 负 　 　 β-内啡肽 负 　 　 环孢菌素A 负 　 -

表7-15 生药活性多糖对细胞因子产生、淋巴细胞功能和抗肿瘤的增强作用

名称 调节作用 应用范围 香菇多糖

（Lentinan） 促进IL-1、IL-2产生 免疫增强剂抗肿瘤　 提高Th功能 　 促进T细胞分化和CTL杀伤活性 　 协同IL-2激活的LAK杀伤活性 　 协同IL-2激活的LAK杀伤活性 　 枸杞子多糖

（Kycium Bsrbarum polysaccharide,LBS） 促进IL-2分泌 调节免疫功能 　 抗 衰老

抗肿瘤（动物实验） 刺五加多糖

（polysaccharide of Acanthopanax Senlicosus,PAS）

　 促进淋巴细胞对丝裂原的 抗癌、抗 白血病 增殖反应

协同ConA诱导淋巴细胞分泌

IL-2

诱生IFN

促进CTL活性