微生物糖发酵（生化）试验

一、单糖发酵试验

（一）、实验原理

单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为0.75~1％。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18~24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO ₂ 和H ₂ 等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。

(二)、实验材料

1．菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2．培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。

(三)实验方法

1．将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。

2．置37℃孵箱培养18~24小时。

3．观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基中PH下降到7.0以下，在酚红指示剂的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示，如果同时产生气体，则培养基中小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以“♁”表示，不分解，则指示剂不变色，用“-”表示。

(四)、实验结果

伤寒杆菌 大肠杆菌

葡萄糖 + ♁

乳 糖 - ♁

二、V-P(Voges-Proskauer)试验

（一）、实验原理

有些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧，生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中被氧化为二乙酰，再与培养基内胍基结合，生成红色化合物，V—P试验阳性。

(二)、实验材料

1．菌种：大肠杆菌，产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2．培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。

3． 试剂 ：V-P 试剂 [40％氢氧化钾水溶液(内含0.3％肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。

(三)实验方法

1. 分别接种大肠杆菌，产气杆菌于两支葡萄糖蛋白胨水中。

2. 置37℃培养48小时后，取出分别加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,摇匀，静置 试管 架上5~15分钟。

(四)、实验结果

培养液变为红色为阳性，不变色为阴性。

三、甲基红试验

（一）、实验原理

某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基PH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等，则培养基的酸碱度仍在PH 6.2以上，加入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。

(二)、实验材料

1. 菌种：大肠杆菌，产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。

3. 试剂：甲基红试剂。

(三)实验方法

1. 分别将大肠杆菌，产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白胨水培养基中。

2. 置37℃培养2~3天取出，分别滴加甲基红试剂2~3滴，混匀，观察结果。

(四)、实验结果

大肠杆菌：+，产气杆菌：-。

四、枸橼酸盐利用试验

（一）、实验原理

枸橼酸盐培养基系一综合性培养基，其中枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸二氢铵为唯一氮源。一般细菌能利用磷酸二氢铵作为氮源，但不一定能分解枸橼酸盐取得碳源。因此，根据可否利用枸橼酸盐来鉴别细菌，如产气杆菌可利用枸橼盐作为碳源，细菌生长繁殖，形成菌苔，分解枸橼酸盐生成碱性碳酸盐，使培养基PH上升到7.0以上，由绿色变为深兰色，为枸橼酸盐利用试验阳性；而大肠杆菌则不能分解枸橼酸盐，得不到碳源，不能生长，无菌苔形成，培养基颜色不发生变化，为枸橼酸盐利用试验阴性。

(二)、实验材料

1. 菌种：大肠杆菌，产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。

2. 培养基：枸橼酸盐斜面。

(三)实验方法

1. 分别将大肠杆菌，产气杆菌接种于两支枸橼酸盐斜面培养基。

2. 置37℃恒温培养24小时后观察结果。

(四)、实验结果

产气杆菌：+（有菌苔生长，培养基变色）

大肠杆菌：-（无菌苔生长，培养基不变色）