细胞凋亡检测-形态学特征的检测方法

一、普通光学显微镜观察方法
1）苏木素－伊红染色（HE染色法）
石蜡组织切片的HE染色
1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。
2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。
3．苏木素染色5min，自来水冲洗。
4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。
6．置伊红液2min。
7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。

2）甲基绿－派诺宁染色法
1．新鲜取材组织固定液中4℃固定3～6小时。
2．直接转入95％乙醇脱水和无水乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
3．切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化至蒸馏水。
4．置染色液中室温下染片约1h。
5．取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。
6．插入丙酮中迅速分化。
7．转入丙酮二甲苯（1：1）稍洗。
8．二甲苯透明2～3次。
9．中性树胶封固。

3）Giemsa染色
1．收集细胞（1×106），PBS洗1次。
2．用细胞涂片离心机制成细胞涂片。
3．甲醇固定3～5min。
4．入Giemsa稀释染色液15～30min，冬天在37℃温箱中染色。
5．用磷酸盐缓冲液分色，以镜下控制为准。
6．涂片晾干后用中性树胶封片。

4）瑞氏（Wright）染色
1．收集细胞（1×106），PBS洗1次。
2．用细胞涂片离心机制成细胞涂片。
3．甲醇固定3～5min。
4．用Wright液染色2min。
5．入Wright磷酸缓冲液稀释液4～10min，然后用蒸馏水冲洗。此时如果颜色较深，可0.08％醋酸分化数秒钟
6．直立晾干后，用中性树胶封固。