细胞凋亡检测：形态学特征的检测方法

普通光学显微镜观察方法

（一）苏木素－伊红染色（HE 染色法）

石蜡组织切片的HE染色

1、取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。

2、切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。

3、苏木素染色5min，自来水冲洗。

4、盐酸乙醇分化30s（提插数下）。

5、自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。

6、置伊红液2min。

7、常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。

（二）甲基绿－派诺宁染色法

1、新鲜取材组织固定液中4℃固定3～6小时。

2、直接转入95％乙醇脱水和无水乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。

3、切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化至蒸馏水。

4、置染色液中室温下染片约 1h 。

5、取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。

6、插入丙酮中迅速分化。

7、转入丙酮二甲苯（ 1 ： 1 ）稍洗。

8、 二甲苯透明 2 ～ 3 次。

9、 中性树胶封固。

（三） Giemsa 染色

1、收集细胞（ 1 × 106 ）， PBS 洗 1 次。

2、用细胞涂片离心机制成细胞涂片。

3、甲醇固定 3 ～ 5min 。

4、入 Giemsa 稀释染色液 15 ～ 30min ，冬天在 37 ℃温箱中染色。

5、用磷酸盐缓冲液分色，以镜下控制为准。

6、涂片晾干后用中性树胶封片。

（四）瑞氏（ Wright ）染色

1、收集细胞（ 1 × 106 ）， PBS 洗 1 次。

2、用细胞涂片离心机制成细胞涂片。

3、甲醇固定 3 ～ 5min 。

4、用 Wright 液染色 2min 。

5、入 Wright 磷酸缓冲液稀释液 4 ～ 10min ，然后用蒸馏水冲洗。此时如果颜色较深，可 0.08 ％醋酸分化数秒钟。

6、直立晾干后，用中性树胶封固。