小麦与蚕豆的小孢子形成
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一、取材
1.小麦(2n=42):4月底,旗叶高于旁叶2-3 cm 。小麦为复穗状花序。成熟的顺序为由中间到两边,成熟时雄配子为三核花粉。
2.蚕豆(2n=12):蚕豆为头状花序,一朵小花有10个花药,有大有小,取其中的一大一小即可。花粉粒为椭圆形,有嵴,多个萌发孔。
二、固定
通常取幼小花药压片时,可以直接放在醋酸洋红液中同时进行固定和染色。但是先经过固定的材料,更易于染色和保存。一般材料可用Carnoy’s固定液固定2-24h ,经80%和70%酒精中各半小时,然后保存在70%酒精中,对细胞学观察效果较好。
三、染色和压片
根据花药大小横切3-4段(或加以纵切),加1滴醋酸洋红(或改良苯酚品红)染液。用解剖针轻压花药,使花粉母细胞从切口出来。静置染色5-10分钟。此时,可从不同大小的花中连续取出几个花药进行同样的染色处理,然后依次取载玻片在酒精灯上横过几次轻微加热,注意不可使其沸腾。同时用解剖针轻压并拨动火药以促进着色,进一步去除残存的花药壁,加盖玻片,使染色液刚好布满,在盖玻片与载玻片之间成一薄层(不能过多,以防止花粉母细胞溢出盖玻片的边缘)。在盖玻片上覆以吸水纸,用拇指均匀用力压下,勿使盖玻片移动。
四、镜检
小麦:小孢子→单核花粉→二核花粉→三核花粉(成熟的花粉粒)
蚕豆:在减数第一分裂完成后不形成细胞板,所以不形成二分孢子。减数第二分裂发生在不同的平面,形成立体锥状排列的四分孢子,外被胼胝体。胼胝体解体后细胞游离出来。在蚕豆的四分孢子立体观中,有时会出现空的细胞(即细胞内无染色体)的现象。