原理
材料与仪器
孢子形成平板或孢子形成培养基 适当的营养成分 YPD培养基
平板
步骤
1)挑YPD或选择性平板上的酵母菌单菌落接种在孢子形成平板上。如果无需选择的话,细胞在转移到孢子形成平板之前,可以在YPD平板上先培养几天。单个菌落在YPD平板上生长3〜4天,而对成小块细胞来说,可在YPD平板上生长2天。这种预生长并 非必需的,但它可以使孢子形成的效率更高些。在转移酵母细胞时,应用少量细胞在孢子形成平 板上涂布相对较大的面积(约1cm2),不应见到成团的接种物。
2)于25℃培养4天。在较髙的温度下孢子形成的效率一般很低。在缺乏氨基酸或其他酵母菌有丝分裂生长所必需的营养成分时,酵母菌就会进行减数分裂形成孢子。某些特殊的酵母菌必须添加特定的营养成分孢子 形成才会更加完全。
3)在载玻片上滴一滴水,挑少量细胞稀释在水中,于放大倍数250×〜400×显微镜下观察悬浮于水中的四分体孢子。
4)四分体呈成簇的4个小球(孢子),被固定于一个致密的子囊中。四个孢子排列为钻石状或正四面体状。
常见问题
如果二倍体基因型无特别的选择标志(当单倍体亲本中的一种具有与二倍体相同的营养需要时),使用解剖显微镜从交配混合物中“拉出合子”,可达到分离二倍体的目的。交配4 h以后,在适合二倍体生长的平板上将交配混合物画几条平行线,使用解剖显微镜通过其典型的形态确认合子细胞,用分离针将它们挑出、与其他细胞分开,为了保证选择的细胞确实是二倍体,将它们接种在孢子形成平板上,经过适当条件培养后,在显微镜下检查四分体孢子的形成。也可采用另一种方法确认:用一对交配型实验菌株与选择出的细胞进行交配,在显微镜下检査每个实验株的合子形成情况,如果二倍体挑选正确,那么就不可能形成合子。
来源:丁香实验