菌株的构建和四分体孢子的分析实验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

一种新的酵母菌株的构建方案分为几个不同的步骤：①二倍体的构建，在这里两个单倍体进行交配；②孢子形成，在这里二倍体细胞被诱导形成孢子；③四分体孢子的制备，在这里囊壁被从四分体孢子上除去；④四分体孢子的分离，在这里来自一个单独的四分体抱子的四个单倍体抱子中的每一个都被明确地安置在一块平板上，并继续生长用作以后的研究。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版

来源：丁香实验

操作方法

二倍体细胞的孢子形成

1）挑YPD或选择性平板上的酵母菌单菌落接种在孢子形成平板上。如果无需选择的话，细胞在转移到孢子形成平板之前，可以在YPD平板上先培养几天。单个菌落在YPD平板上生长3〜4天，而对成小块细胞来说，可在YPD平板上生长2天。这种预生长并非必需的，但它可以使孢子形成的效率更高些。在转移酵母细胞时，应用少量细胞在孢子形成平板上涂布相对较大的面积（约1cm2),不应见到成团的接种物。2）于25℃培养4

在液体培养基中形成孢子

1）在合适的培养容器中，加入YPD培养基培养，待形成孢子的二倍体细胞生长至 OD600为 2.5〜3.0 (约为 8×107 细胞/mL)。2)转移1 mL培养液至一支无菌15 mL聚丙烯试管中，1200 g离心5 min。3)倒去上清，用5 mL无菌水重悬细胞，涡旋振荡使细胞充分悬浮，再按步骤2离心。4)倒去上清，细胞用1 mL添加了特定二倍体细胞所需营养成分的孢子形成液体培养基悬浮。5）于30