免疫金法检测贝氏柯克斯体
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一、材料与方法
1.Q热立克次体株及对照菌株：Q热立克次体七医株(Ⅰ相和Ⅱ相)，李株(Ⅰ相)，YS-8株(Ⅰ相)，Henzerling株(Ⅰ相)和九里株(Ⅱ相)及普氏立克次体均为我室保存，嗜肺军团菌LP6，LP8抗原由大坪医院检验科惠赠，绿脓假单胞菌PN103株，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌由本室保存。
2.鼠抗Q热立克次体Ⅰ相单抗杂交瘤1B 1 D 4 D 8 (Ⅰ相ELISA效价＞1∶12 800，Ⅱ相效价＜1∶3 200)由本室自制。按文献［2］报道的方法标记成10 nm的胶体金探针。
3.用兔抗Q热立克次体免疫血清包被硝酸纤维素膜(NC膜孔径0.45 μm)，参照文献［2］介绍的方法建立Q热立克次体的免疫金检测法(DIGFA)。
4.用所建立的DIGFA检测实验感染豚鼠血、小鼠肝脾及蜱标本中的Q热立克次体。实验动物的感染按我室常规进行，其中豚鼠采集感染后6、11、16、30 d取血分离的白细胞16份；小鼠肝、脾标本40份，采自20只昆明鼠受染后2、4、6、8、10、12、14、20、30 d，称量后，用去离子水研磨成5%的悬液，1 000 g离心15 min，取上清液待检；感染Q热立克次体的非洲钝缘蜱血淋巴和成蜱及其卵，下代幼虫悬液标本共8份。
二、结果
1.探针的特异性试验结果如表1所示。
表1 免疫金探针特异性试验结果
| Q热立克次体菌株 | 结果 | 对照菌株 | 结果 |
| 七医株颗粒性抗原 | ++++ | 普氏立克次体 | - |
| 七医株超声粉碎抗原 | ++++ | 绿脓假单胞菌PN103 | - |
| 九里株 | ++++ | 嗜肺军团菌Lp6 | - |
| 李株 | +++ | 嗜肺军团菌Lp8 | - |
| Henzerling株 | ++ | 大肠埃希菌 | - |
| Ys-8株 | +++ | 金黄色葡萄球菌 | - |
| 七医株Ⅱ相 | +/- | 阴性对照 | - |
注：以Q热立克次体七医株检测结果为++++，阴性对照为-度量各菌株试验结果 2.敏感性试验：取各种稀释度的纯净颗粒性七医株Ⅰ相抗原各50 μl点于同一硝酸纤维素膜中，制成13个斑点。用胶体金探针做检测，经3次重复均只有前4个斑点为阳性，即10 -3 ，相当于50 ng的Q热立克次体抗原。
3.实验感染标本检测：豚鼠感染立克次体后，不同时间内采血，用DIGFA检测结果：小鼠感染后2 d即可用DIGFA检测到肝、脾中立克次体抗原，6 d阳性最强，8 d减弱，12 d后检测为阴性，该结果与感染后小鼠脾印片经常规姬姆萨染色所见的立克次体消长相吻合。对照小鼠标本检测均阴性。受染蜱血淋巴和成蜱悬液经检测为阳性，而其卵、下代幼虫及正常蜱标本均为阴性。
三、讨论
聚合酶链反应(PCR)和核酸探针检测立克次体，特异性和敏感性均很好 ［3］ ，但难以推广。我们将多个标本点于同一张NC膜上进行批量标本的DIGFA检测，且直接检测颗粒性Q热立克次体抗原(目前文献报道的多是检测抗体，如登革热病毒抗体 ［4］ ，流行性出血热病毒抗体 ［5］ 等)，有很好的特异性。敏感性试验结果表明，该法至少可检出50 ng的Q热立克次体抗原。
DIGFA检测豚鼠血液中Q热立克次体的方法，可能进一步应用于Q热病人的快速诊断。用DIGFA检测受染小鼠脾脏的结果与常规姬姆萨染色所见的Q热立克次体在脾脏中的消长相吻合，故可望应用于Q热自然疫源地调查中野外啮齿动物脏器的检查。
参考文献
1 俞树荣.编著.Q热的病原与防治.北京：科学技术文献出版社, 1990.42-45.
2 Hayat MA. Collidal gold-principales, methods and applications. San Diego: Acad Press, 1989, 23-39.
3 余全，俞树荣.用DNA探针技术检出Q热立克次体.中华微 生物 学和免疫学杂志，1994，14：349-351.
4 姚海军. 斑点免疫金渗滤法检测 血清 中抗登革热病毒IgM抗体的研究. 陕西医学检验, 1997, 12: 18-19.
5 赵中夫, 郭进军, 阎小君. 滴金免疫法快速检测肾综合征出血热 血清 特异性IgM的研究. 中华医学检验杂志, 1998, 21: 96-98.
