免疫血清的制备

　　一、原理
　　具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。另外，抗体的产生具有回忆应答的规律性，牨m现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。这是由于记忆性B细胞参与再次应答所致。
　　二、免疫方法
　　根据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。
　　1.　用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤；
　　2.　第一次免疫: 用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA-IgG)液1ml，每侧脚掌皮下各注入0.5ml。
　　3.　第二次免疫：间隔10-14天后，于两侧 窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG，每个淋巴结注0.1ml，其余注入淋巴结附近皮下共1ml。如淋巴结未肿大或肿大不明显时，直接注入两侧　窝及鼠蹊部皮下。
　　4.　间隔7-10天后，从耳静脉采血0.5～1.0ml，分离血清，以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血)。效价至少应达到1∶16以上时才能放血。
　　5.　若效价未达到要求，可用不加佐剂的抗原液(人IgG)耳静脉内注射免疫。即于1周内注射3次，分别为0.1、0.3、0.5ml。间隔1周再试血。如效价达到要求应立即放血。另外,也可在第2次免疫后，以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人IgG)(简称FIA-IgG)再免疫1-2次。注射部位、剂量和间隔均同第2次，再试血测抗体效价，如效价达到要求立即放血。
　　三、放血
　　(一)　心脏采用血法
　　1.　家兔仰面，四肢缚于动物固定架上(或由助手抓住四肢固定)；
　　2.　剪去左胸部兔毛，消毒皮肤；
　　3.　用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏，并使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏动最强的部位；
　　4.　用50ml注射器(连接16号针头)，倾针45°角度，对准心搏最强处刺入心脏抽血致死；
　　5.　将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中，待凝固后分离血清。
　　(二)　颈动脉放血法
　　1.　家兔仰卧同上固定。头部略放低以暴露颈部。剃毛及消毒皮肤；
　　2.　沿颈部中线切开皮肤约10cm，分离皮下组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌；
　　3.　分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后使之游离；
　　4.　于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住；
　　5.　用尖头小剪刀在两根丝线间的动脉璧上剪一小口，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱；
　　6.　松开血管夹，使血液流入灭菌三角烧瓶中。一般一只家兔可放血80～100ml。