胶体金制备前的准备

 制备胶体金的方法很多，其中应用较为广泛的是还原法，而分散法和其他凝聚法都不合乎要求。还原法的基本原理是在氯化金溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子。在医学研究中最常用的还原剂有白磷、乙醇、过氧化氢、抗坏血酸、硼氢化钠、柠檬酸钠及鞣酸等。本节将重点介绍应用上述还原剂制备胶体金的具体方法和步骤，还可根据各实验室的条件及所需合成颗粒的大小，来选择合适的方法。现将常用的几种方法介绍如下：①白磷还原法(Isigmondy，1905年)可合成3nm左右大小的金颗粒；②白磷还原法(1sigmondy及IsigmondyThiessen，1925年)经改良后，可合成5～12nm大小的金颗粒；③抗坏血酸还原法(Statis和Fabrikanos，1958年)可合成6～13nm大小的金颗粒；④柠檬酸三钠还原法(Frens，1973年)可合成5nm、15nm、30nm、60nm大小的金颗粒；⑤乙醇—超声波还原法(Baigent和Muller，1980年)可合成6～10nm大小的金颗粒；⑥硼氢化钠还原法(Trchopp等，1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒；⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(Slot等，1985年)可合成3～17nm大小的金颗粒。作者实验室主要用单宁酸—柠檬酸三钠还原法、柠檬酸三钠还原法及硼氢化钠还原法，主要根据合成颗粒大小来选择。
 ( 一 ) 玻璃器皿的清洁
还原法可以认为是重结晶过程，颗粒的大小取决于结晶核形成的速度及结晶核生长的速度。因此，用于制备胶体金的玻璃器皿应绝对清洁。因为玻璃表面性状对还原过程的启动有重要作用，少量的污染会影响胶体金的生成，造成颗粒大小不一或液体浑浊。处理方法是将玻璃器皿清洁晾干后，人清洁液内浸泡24h，取出后依次用自来水和蒸馏水洗净，凉干，硅化，也可不经硅化。第一次生成胶体金稳定玻璃器皿表面，然后弃去，再用蒸馏水洗后即可再用。最好是所有的玻璃器皿专用化，以减少污染。玻璃器皿表面应无明显的划痕，否则也会影响胶体颗粒的均一度。
 ( 二 ) 试剂 的配制要求
(1)配制 试剂 均用双 蒸馏 水或三 蒸馏 水，或用去离子水。
(2)氯化金水溶液的配制  氯金酸(AuCl ₃ ·HCl)每支为1g装，用时用蒸馏水一次全部稀释成l％水溶液，呈现黄色的透明状，应无任何沉淀，未用完部分可保存在4℃冰箱内，长期使用。
(3)SPA纯晶、特异性抗体或第二抗体必须经亲和层析，琼脂免疫双扩散效价为1：64以上才可选用，其他蛋白及受体也需高度纯化。
(4)白磷或黄磷乙醚溶液的配制  白磷在空气中易燃烧，操作时要小心。把白磷放在蒸馏水中切成小块，放在滤纸上吸干水分后，迅速放入已准备好的乙醚中，轻轻摇动，等完全溶解后即得到饱和溶液，并贮藏于棕色密闭瓶内，阴凉处保存。
(5)其他试剂配制后最好用一定规格的 超滤 膜过滤，以去除大分子聚合物。