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人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程

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本品系用狂犬病固定毒(aG)适应株接种原代地鼠肾单层细胞,培养后收获病毒液,加入甲醛溶液灭活后浓缩,再加氢氧化铝制成。用于预防狂犬病。
1 毒种
1.1 毒种来源
狂犬病固定毒aG适应株系用狂犬病固定毒北京株先在地鼠肾细胞传代适应后,再通过豚鼠脑内交替传代适应而成。由中国药品生物制品检定所检定、保存与分发。生产用毒种传代应不超过10aG交替代。
1.2 毒种检定
1.2.1无菌试验
aG毒种每次传代收剖后均须做无菌试验,合格者方可使用。
1.2.2病毒滴定
aG毒种用体重11~13g小白鼠进行脑内病毒滴定,滴度≥8.0LogLD50/1.0mL方可用于生产。
1.2.3纯毒试验
生产前和生产末期用小白鼠做脑内法中和试验,以鉴定毒种的特异性。所用特异性抗血清由中国药品生物制品检定所提供。中和指数必须在500以上。生产过程中如对毒种发生疑问,应及时进行鉴定。
1.3 毒种传代
选择体重120~160g健康豚鼠,脑内注射,选潜伏期80~100小时具有典型狂犬病症状者放血致死,无菌取脑。豚鼠脑连续传代不超过5代。
1.4 毒种保存
供生产用aG株在-60℃以下保存,不得超过1年。
2 疫苗制造
2.1 细胞制备
2.1.1地鼠
选用12~14日龄健康地鼠,如腹腔有充血、渗出液、肾脏异常等应废弃。
2.1.2解剖
处死地鼠,用消毒液洗涤皮毛数次,末次浸泡一定时间,无菌取肾,置于瓶中剪碎。
2.1.3细胞消化及分装
将剪碎肾块洗涤数次,加入适量胰蛋白酶消化液,置2~8℃过夜(约16~20小时)或37℃水浴消化适当时间,弃去消化液,经洗液洗涤2~3次,振摇或吹打分散细胞,加入适量生长液,分装培养瓶,置37℃±0.5℃培养长成单层。
2.1.4使用液体
均不得含青霉素或其他β内酰胺类抗生素。
2.1.4.1生长液
为含不超过10%小牛血清水解乳蛋白SMI液或其他适宜培养液,可加入适量抗生素。
2.1.4.2浸泡液
为水解乳蛋白SMI液或其他适宜培养液,其中保护剂可选用0.1%以上人白蛋白,可加入适量抗生素。
2.1.4.3维持液
为199或其他适宜的溶液,其中保护剂中可选用0.4%以上人白蛋白,可加入适量抗生素。
2.1.5外源因子检查
每生产批细胞留5%(或不少于500mL)悬液作为对照细胞检查外源病毒。该细胞除不接种病毒外,细胞浓度和处理均与生产过程平行进行。至原液收获之日用显微镜观察,应无病变发生。并用0.2%~0.5%豚鼠红细胞(4℃保存不超过7天)进行血吸附试验,置4~8℃30分钟判定结果;再置20~25℃30分钟再次判定结果,均应为阴性。如有可疑病变或血吸附可疑阳性,在同种细胞上继续盲传,如传出病毒,该批细胞制备的疫苗应予废弃。
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