pH对酶活力的影响——最适pH的测定

酸性磷酸酯酶动力学性质分析

实验（二） pH对酶活力的影响——最适pH的测定

[原理]

pH对酶活力的影响极为显著。酶表现其最高活性时所处的pH即酶的最适pH，因为通常各种酶只在一定pH范围内才表现它的活力；一种酶在不同pH条件下所表现出来的活性不同。

pH之所以对酶活性有很大影响，很可能是因为它改变了酶活性部位有关基团的解离状态。在最适pH时，酶分子上活性基团的解离状态，最适于酶与底物的结合；而高于或低于最适pH时，酶活性部位基团解离状态不利于酶与底物的结合，酶活力也相应降低。pH也可影响底物的解离及反应系统中其它组分的解离。缓冲系统的离子性质和离子强度，也可能对酶反应产生影响。另外，pH除了对酶活性有很大影响外，对酶的稳定性也有很大影响。过高过低的pH会改变酶的活性中心的构象，或甚至改变整个酶分子的结构使其变性失活。

本实验测定pH对酸性磷酸酯酶活性的影响并测定最适pH。

 

[方法和步骤]

取11支试管0～10编号，0号为空白。各管加入0.1mL 25mmol/L磷酸苯二钠水溶液。从l号管至10号管依次加入不同pH的缓冲液0.4mL，摇匀。于35℃恒温水浴预热2min。各管记时加入稀释好的酶液0.5mL，充分摇匀，精确反应15min后，加入1mol/L碳酸钠溶液2mL，再加入0.5mL Folin-酚稀溶液，继续保温显色10min。空白管所加 试剂 相同，但酶液最后加入。取出冷却后，以0号管作空白，置 分光光度计 中在680nm波长处读取各管的吸光度A ₆₈₀ 值。

管号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	undefined
反应pH	2	3	3.5	4	4.5	5	5.5	6	6.2	7	5.5
25mmol/L磷酸苯二钠	各0.1mL
相应pH缓冲液	各0.4mL
35℃预热2min
稀释酶液	各0.5mL
35℃精确反应15min
1mol/L碳酸钠溶液	各2.0mL
Folin-酚稀溶液	各0.5mL
35℃保温显色10min
A 680

注：0号管反应pH为5.5，酶液最后加入。

[数据处理]

以反应pH为横坐标，A ₆₈₀ （代表初速度）为纵坐标，绘制pH～酶活力曲线，求出酸性磷酸单 酯酶 在本实验条件下的最适pH。