温度对酶活力的影响——最适温度的测定

酸性磷酸酯酶动力学性质分析

温度对酶活力的影响——最适温度的测定

[原理]

温度对酶的影响具有双重作用。一方面，温度加速酶反应的速度；另一方面酶是蛋白质，温度升高会加速酶蛋白的变性。因此，在较低温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大；超过一定温度后，反应速度下降。

酶反应速度达到最大值时的温度称酶反应的最适温度。如果保持其它反应条件恒定，而在一系列变化的温度下测酶活力；以温度为横坐标，反应速度为纵坐标作图，可得到一条温度-酶活力曲线，从中可求得最适温度。

各种酶的最适温度是不同的，一般动物组织的各种酶的最适温度在35～40℃，植物和微生物的各种酶的最适温度范围较大，大约在32～60℃之间。但最适温度不是酶的特征常数，一种酶的最适温度不是一个恒定数值，它与反应条件有关。如反应时间延长，一般最适温度降低。因此，对同一种酶来讲，应说明是在什么条件下的最适温度。

温度是影响酶促反应速度的重要因素之一。在温度较低时，绝对温度对Vmax的影响遵守Arrnenius公式程式： 式中 Ea——酶促反应的活化能（Jžmol －1 ）；

R——气体常数（8.314Jžmol －1 žK －1 ）；

T——绝对温度（K）；

Vmax——当酶全部被过量底物饱和时所测得的反应速度。

实验时，测定不同温度下的酶促最大反应速度Vmax，以log 10 Vmax对绝对温度T作图，得一斜率等于-Ea/ 2.3R的直线，由此可求得活化能Ea。

[方法和步骤]

取8支试管0～7编号，0号为空白。各管加入0.5mL 5mmol/L磷酸苯二钠溶液（pH5.6）。将1至7号管依次相对应地置于20℃、30℃、35℃、40℃、50℃、60℃和70℃的恒温水浴中，预热2分钟。

然后各管计时加入稀释好的酶液0.5mL，充分摇匀，精确反应15min后，加入1mol/L碳酸钠溶液2mL，再加入0.5mL Folin-酚稀溶液，继续保温显色10min。空白管所加 试剂 相同，但酶液最后加入。取出冷却后，以0号管作空白，置分光光度计中在波长680nm处读取各管的吸光度A 680 值。。

整个操作过程如下：