无菌室标准化规程

一、目的
本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
 

二、安全注意事项
严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
 

三、规程

3.1  无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10 000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。

3.2  无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

3.3  严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

3.4  无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，等等。

3.5  无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

3.6  需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

3.7  工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。

3.8  无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。

3.9  供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

3.10  每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

3 .11  吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

3.12  接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

3.13  带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。

3.14  如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

3.15  凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

3.16  无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90 mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15 ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10 000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。