双向电泳溶液配制方法

A. 裂解液 (lysis solution)
       (8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml)

	Final concentration	Amount
Urea(Fw 60.06)	8M	19.2g
CHAPS	4%(w/v)	1.6g
Pharmalyte3-10	2%	800μl
Double distilled H2O		To 40ml

新鲜配制或者分装贮存于-20℃
       ① 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。
       ② 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。
       ③ 如果需要，蛋白质酶的抑制剂和或者还原剂可以加入。

B．水化液
       （不含有 IPG buffer, Rehydration stock solution without IPG   buffer）
       (8M Urea, 2% CHAPS, bromophenol blue,25ml)

	Final concentration	Amount
Urea (FW 60.06)	12g	12g
CHAPS	2%(w/v)	0.5g
Bromophenol blue	0.002%(w/v)	50μl
Double distilled H2O		To 25ml

分装贮存于-20℃
       ① DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。
       ② 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。
       ③ 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂23或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。

溴酚蓝储液

	Final concentration	Amount
Bromophenol blue	1%	100mg
Tris-base	50mM	60mg
Double distilled H2O		To 10ml

C. 水化液
       （含有 IPG buffer，Rehydration stock solution with IPG buffer）
       (8M Urea，2% CHAPS，0.5%  or 2% IPG buffer，bromophenol blue，25ml)

	Final concentration	Amount
Urea (FW 60.06)	8M	12g
CHAPS	2%(w/v)	0.5g
IPG buffer(same pH range as the IPG strip)	0.5%or 2%(v/v)	125 or 500μltd>
Bromophenol blue	0.002%(w/v)	50μl 1% solution
Double distilled H2O		To 25ml

分装贮存于-20℃
       ① DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。
       ②IPG buffer 的浓度取决于所用的等电聚焦系统和 IPG胶条的 pH 范围。
       ③ 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。
       ④ 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。
       ⑤ 浓度为 0.5%的 IPG buffer用 125μl IPG buffer，浓度为 2%则用 500μl。

D.平衡液（SDS equlibration buffer）
(50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

	Final concentration	Amount
1.5M Tris-cl,pH8.8(see solution F)	50mM	50mM  6.7ml
Urea(Fw 60.06)	6M	72.07g
Glycerol(87% v/v)	30%(v/v)	69ml
SDS(Fw 288.38)	2%(w/v)	4.0g
Bromophenol blue	0.002%(w/v)	400μl 1% solution
Double distilled H2O		To 200ml

分装 40ml 贮存于-20℃。这是一个贮存液。用之前在加 DTT或者碘乙酰胺。

E.单体贮存液（Monomer stock solution）
       （30% acrylamide,0.8% N,N!-methylenebisacrylamide,200ml）

	Final concentration	Amount
Acrylamide(Fw 71.08)	30%	60.0g
N,N`-methylenebisacrylamide（Fw 154.17)	0.8%	1.6g
Double distilled H2O		To 200ml

用 0.45微米的滤纸过滤。4℃避光保存。

F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer)
(1.5M Tris-Cl pH8.8, 1000 ml)

	Final concentration	Amount
Tris-base(Fw 121.1)	1.5M	181.5g
Double distilled H2O		750ml
HCl(Fw 36.46)		Adjust to pH8.8
Double distilled H2O		To 1000ml

用 0.45微米的滤纸过滤，4℃保存。

G.10% SDS溶液

	Final concentration	Amount
SDS(Fw 288.38)	10%(v/v)	5.0g
Double distilled H2O		To 50 ml

用 0.45微米的滤纸过滤，室温保存。

H.10%过硫酸铵(10% Ammonium persulphate)

	Final concentration	Amount
Ammonium persulphate(Fw 228.20)	10%	0.1g
Double distilled H2O		To 1ml

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。用之前配制。

I.凝胶贮存液（Gel storage solution）
(0.375M Tris-Cl pH 8.8, 0.1% SDS 200ml)

	Final concentration	Amount
4x Resolving gel buffer(see solution F)	1x	50ml
10% SDS(see solution G)	0.1%	2ml
Double distilled H2O		To 200ml

4℃保存

J.电泳缓冲液（SDS electophoresis buffer）
(25mM Tris,192 mM glycine, 0.1%SDS,5 liters)

	Final concentration	Amount
Tris base(Fw 121.1)	25 m	15.1g
Glycine (Fw 75.07)	72.1g	72.1g
SDS(Fw 288.38)	0.1%(w/v)	5.0g
Double distilled H2O		Too 5000ml

室温保存。因为该溶液的 pH值不需要校准，所以可以直接在大试剂瓶种配制溶液。一次可以配制 20L于室温保存。

K.琼脂糖封顶液（Agrose sealing solution）

	Final concentration	Amount
SDS electophoresis buffer(see solution J)		100ml
Agrose (NA or M)	0.5%	0.5g
Bromophenol blue	0.002%(w/v)	200μl

把所有的药品都加入到一个 500ml的锥形瓶中。摇动混匀。在微波炉中加热直到琼脂糖完全溶解。不要让溶液沸腾。2ml分装，室温保存。