对产生抗体的细胞克隆进行分析
互联网
1165
对产生抗体的细胞克隆进行分析
对产生抗体的细胞克隆,一方面检查其染色体数目,确定是否接近两种亲代细胞染色体之和(约80~100条)。另一方面,取其培养上清或诱生的腹水,检查抗体免疫球蛋白的类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量等。
1、杂交瘤细胞染色体的检查 常采用秋水仙素裂解法。
2、McAb类型、亚型的测定 通常以兔抗小鼠Ig类型和亚类的标准抗血清,采用琼脂双扩或ELISA夹心法测定McAb与抗小鼠Ig类型和亚类的反应性,以确定McAb属哪一类型和亚类。
3、McAb的特异性鉴定 其检测方法应该多样化,包括ELISA、免疫荧光、放免测定、间接血凝、印迹试验、抽滤斑点免疫结合法、化学发光免疫斑点法(CDIA)以及各种结合抑制试验等,详细步骤参见有关章节。
4、McAb的效价测定 McAb的效价以培养上清或腹水的稀释度表示。在凝集反应中,腹水效价可达5×104 ;在ELISA或RIA中,腹水效价可达106 ,如低于105 ,该抗体用于诊断的敏感性将不高。
5、McAb的亲和力测定 抗体亲和力的测定对可溶性抗原可采用免疫沉淀、快速ELISA、免疫荧光、RIA竞争抑制试验以及生物传感器分析法等;对细胞性抗原还可采用FACS测定。
6、McAb识别抗原表位的测定 一个抗原分子表面常有多个抗原决定簇,用该抗原制备的McAb,有的是抗同一决定簇,有的则是抗不同决定簇。可用竞争抑制试验、相加指数法、微机集群分析以及分子生物学方法等测定McAb所识别的抗原位点。
7、McAb作用抗原的分子量 常采用免疫印迹试验测定McAb结合的抗原分子量。