HLA/抗原肽四聚体制备技术
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HLA/ 抗原肽四聚体制备技术
MHC/抗原肽四聚体（tetramer）是借助亲和素-生物素结合的原理，在体外将MHC分子（MHC-I类分子包括β2微球蛋白）及其所提呈的抗原肽组装成的MHC-四聚复合物，作为TCR结合的配体，用于检测和分离特异性T细胞。图11-1是HLA-I/抗原肽四聚体结构示意图。图示由亲和素与四个生物素化的HLA-I类分子抗原肽复合物单体结合后形成的四聚体结构，其中亲和素分子还结合有荧光标记物。
HLA-I/抗原肽四聚体示意图
MHC/抗原肽四聚体能够模拟靶细胞表面MHC/抗原肽复合物，相当于TCR识别的配体，它能被某一特异性T细胞克隆识别，而且四聚体的MHC/抗原肽复合物与TCR的结合比单体的MHC/抗原肽复合物更为稳定。由于亲和素结合有荧光标记物（通常为PE），从而借助流式细胞分选术可以将结合有MHC/抗原肽四聚体的T细胞克隆从无数种T 细胞克隆中检测并分离出来。
MHC/抗原肽四聚体通过TCR与特异性T细胞结合
HLA-I/抗原肽四聚体制备包括三个过程，HLA-I类分子单体的制备和纯化，MHC-I类分子单体的生物素化和纯化鉴定，四聚体的组装及应用。
【HLA-I类分子单体的制备和纯化】
HLA-I重链、轻链的制备
MHC-I 单体的折叠
折叠复合物的浓缩
透析或用脱盐柱进行缓冲液交换
↓
【MHC-I 单体的生物素化和纯化鉴定】
MHC-I 单体的生物素化
S300 Column 层析
Mono Q Column 层析
生物素化分析
↓
【四聚体的组装及应用】
四聚体的制备
四聚体的应用
