痘苗病毒载体介导的基因转移

痘苗病毒载体介导的基因转移

 

    痘苗病毒 是迄今所知结构最为复杂的一类病毒。病毒基因组由长200kb的线性双链DNA分子组成，自身携带有一套完整的基因转录调控系统，在宿主细胞胞质中表达，介导病毒复制。当病毒进入细胞后，首先转录并表达早期蛋白包括刺激邻近细胞生长的因子，对抗宿主免疫机制，然后进行病毒基因组复制及病毒中期转录。病毒复制产生的子代DNA分子亦可充当模板进行后续的中期及晚期基因的转录。当晚期结构蛋白合成后，感染性病毒颗粒自组装，并在细胞质中以出芽方式离开感染细胞，此过程不依赖于宿主细胞的调控。

 

    痘苗病毒载体插入外源基因的容量高达40 kL，并能同时表达多种外源基因。病毒的宿主范围较广，病毒基因组不整合到宿主染色体中，作为基因治疗载体有较高的安全性。痘苗病毒DNA没有感染性，而且痘苗病毒基因组十分庞大，因此，不可能通过基因拼接直接将外源基因插入到病毒基因组中。痘苗病毒载体的构建原理是利用痘苗病毒DNA复制过程天然发生的体内同源重组，通过蚀斑选择来获得重组病毒。同时，由于痘苗病毒在胞质进行复制并具有自己独立的转录系统，利用痘苗病毒载体系统表达外源基因，需要痘苗病毒的启动子来驱动。外源基因表达的时间与水平由所选择的处于不同时相的病毒启动子的活性来决定。一般要获得高水平的表达，应选择晚期或早、晚期启动子。

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