激光扫描共聚焦显微镜在组织化学和免疫组织化学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜在组织化学和免疫组织化学中的应用

 

    激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confcal microscope,LSCM)是激光、电子摄像和计算机图像处理等现代高科技手段相互渗透的产物。由于其高分辨率，高灵敏度及高放大率等特点，在细胞水平上能作多种功能测量和分析，如荧光定量测量、共聚焦图像分析、三维图像重建、活细胞动力学参数监测和细胞间通讯研究等，成为生物医学重要的研究工具。一台配置完备的激光扫描共聚焦显微镜已经在功能上完全取代了以往任何一种光学显微镜，它相当于几种制作精良的常用显微镜有机组合，如倒置显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜及相差显微镜等，可谓是普通光学显微镜质的飞跃。激光扫描共聚焦显微镜除能对组织细胞进行三维图像分析和各种荧光标记物的微量分析外，还能进行细胞内Ca²⁺ 和pH值等动态分析测量、细胞受体移动检测、膜电位变化检测、酶活性和物质转运测定等。因此，它可以对组织细胞的多种功能进行自动高效地微量定位和定量。

 

    激光扫描共聚焦显微镜在组织化学和免疫组织化学中的主要应用是通过一种或多种荧光探针标记后，对固定或活体组织细胞标本进行观察研究，免疫荧光组织化学是应用最多的技术。激光扫描共聚焦显微镜具有紫外光和激光双重激发光源系统，免疫荧光组织化学染色后抗体己被标记荧光素，不同的荧光素被不同波长的光激发，荧光强度的变化可被激光扫描共聚焦显微镜中的计算机分析软件采集分析，从而准确反映各指标量的变化。当这些标本用普通荧光显微镜观察时，来自焦点以外其他区域的荧光对结构分辨率干扰较大，尤其是标本厚度在2um以上时，其影响更为显著。共聚焦方式可以排除焦点之外荧光干扰使分辨率提高。激光扫描共聚焦显微镜的功能可分为图像分析功能和细胞生物学功能两大类，运用于组织化学和免疫组织化学方面的主要是图像分析功能。凡是可以标记特异性荧光探针的组织细胞标本均可以利用激光扫描共聚焦显微镜进行图像分析。它的图像分析处理功能主要体现在三方面，即光学切片、三维图像重建和荧光定位以及定量分析。

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