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肝中DNA的分离与鉴定原理

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细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在,其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中,核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol/L氯化钠溶液中的溶解度相差很大,核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度,脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后,用0.14mol/L氯化钠溶液抽提,可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠,可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。

 SDS(十二烷基硫酸钠)能使脱氧核糖核蛋白产生解聚作用,在含有脱氧核糖核蛋白的溶液中加入SDS,DNA即与蛋白质分离开,用氯仿将蛋白质沉淀除去,而DNA溶解于水相,最后用冷乙醇将DNA析出,而获得纯化的DNA。在氯仿中加入少量异戊醇能减少操作过程泡沫的产生,并有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白,下层有机溶剂相维持稳定。 DNA和RNA在波长260nm处有很高的吸收峰值,蛋白质则在280nm处有很高的吸收峰值。利用这个原理,我们测定纯化样品在260nm和280nm处的吸光度,可以推算出样品中DNA的浓度,并判断其纯度。用标准样品测得在波长260nm处,1ug/ml 双链DNA钠盐吸光度为0.02,单链DNA钠盐为0.025(光程为
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