补体C4溶血覆盖技术

电泳是通过电场作用将C4迁移率不同的同种异型分离开，然后依照分型标准定型。在某些情况下，C4A某种同种异型与C4B某种同种异型迁移率相同不易区分开，此时可用溶血覆盖技术加以区别。

1、原理 用肼处理豚鼠血清，可灭活其补体成分C4，使之成为帜缺乏的血清。将C4缺乏的豚鼠血清与致敏的SRBC混合，因缺乏C4，补体的攻膜效应不能发挥，将混合物与一定浓度琼脂糖混合倾注在电泳完毕的凝胶板上，凝胶板上C4区带使混合物中的C4成分得以补偿，溶血反应发生，凝胶板上C4条带区可出现透明溶血带。C4B的溶血活性较C4A高，先发生溶血反应，因此可用此法将不易区别的C4A与C4B区分开来。

2、主要试剂 R4豚鼠血清的制备：取正常豚鼠血清lmL加0.16mol/L的水合肼0.1mL，37℃2h。

3、操作步骤

（1）取SRBC5mL用生理盐水洗3次，用GVB²⁺配成10%的浓度；

（2）取5mLl0%SRBC加50gL0．2mol/LEDTA和5mL 6U的溶血素混合，37℃30min。注意应经常摇匀，使抗原与抗体分子充分接触，然后用生理盐水洗2次，GVB²⁺洗1次；

（3）根据凝胶板的大小做一个有机玻璃框，厚度为lmm，压在电泳完毕的凝胶板上；

（4）用GVB²⁺配制1%的琼脂糖，隔水煮沸，待其完全透明后放50℃恒温水浴中冷却至50℃时加入1.5mLEA与1.5mLR4豚鼠血清，充分混合，倾注在凝胶板上；

（5）37℃孵育约10rain，直至观察到C4B溶血带出现且清晰为止。用1%戊二醛固定，PBS漂洗，干燥保存。