采用优化红球菌的地高辛标记探针的DNA印迹方案（图）

采用地高辛高效标记混合物(ROCHE) 标记DNA探针

将10 ng~3μg的DNA探针（基因组、质粒或基因片段）用蒸馏水稀释至16μl

煮沸10分钟使DNA变性，迅速放在冰上冷却，以防其重退火。

加入4μl地高辛高效标记混合物，振荡混匀

37℃下过夜培养

加入2μl 0.2M EDTA (pH 8) 使反应停止，并于65℃ 下10min加热降低其活性。

使用前煮沸探针10-20min

使用过的探针可以储存在-20℃的杂交缓冲液中，并能重复使用。

将DNA从凝胶转移到膜上

将凝胶在合适的电压下进行电泳得到单一的带型；染色并照相以参考大小。

小片段转移较有效。对于大的DNA片段，可增用短波透射仪进行2分钟的紫外切割步骤

将凝胶转移至可密封的Tupperware 塑料容器中

传统的转移方法

室温下在0.25的盐酸中培养40分钟（要盖住凝胶），使之脱去嘌呤

将2X置于MilliQ溶液中漂清

将2X置于变性溶液中培养20min以附着在脱嘌呤位点

在中性溶液中培养30min

如图所示，采用20X SSC作为转化溶液，进行毛细管转化

转化过夜（48小时脉冲场凝胶电泳）

另供选择的快速转化方法（Phil 的最爱）

室温下于0.25 M HCl中培养直至染色带变成黄色（20分钟）

将2X置于MilliQ溶液中漂清

如图所示，采用0.4N 的NaOH溶液作为转化溶液，进行毛细管转化

转化过夜（48小时脉冲场凝胶电泳）