单头昆虫基因组DNA的提取
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实验试剂
2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]
5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDTA)[美国Amresco公司]
6. 电泳缓冲液TBE:浓贮存液5×TBE:54.0 g Tris碱,57.1 g硼酸,20 ml 0.5 M EDTA,pH=8.0,加蒸馏水定容至1 L,工作液为稀释的0.5×TBE
7. 裂解液成分:50 mM KCl,10 mM Tris pH 8.4,0.45% Tween 20,0.2% gelatin,0.45% NP40,60 μg/ml proteinase K
实验设备
5. 凝胶成像系统(Gel Doc EQ)[美国Bio-Rad公司]
7. 紫外分光光度计(Beckman Du 650)[日本Sanyo公司]
实验材料
实验步骤
1. 吸10μL裂解液于封口膜上,将一头烟粉虱置于提取液中,用0.2 ml PCR管底部将烟粉虱充分研磨匀浆;
2. 把匀浆液吸入1.5 ml离心管中,再取15 μL裂解液清洗封口膜研磨处,将清洗液与匀浆液合并;
5. 短暂离心后,每管加入25 μLddH2 O,即可用于PCR反应,或储藏于-20℃冰箱中。
6. 吸取1 μL的DNA样品,加水稀释50倍至50 μL至充分混匀,放置于比色皿中,以50 μL纯水作为对照校正零点,然后检测待测样品的OD260/280值。