大鼠血清、血浆及相关液体样本中皮质醇(Cortisol)含量的检测
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实验试剂
1. 大鼠皮质醇(Cortisol)定量检测试剂盒(ELISA)
实验设备
实验步骤
5. 洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6. 加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
8. 洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s)，37℃避光显色15min。
10. 终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12. 计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
注意事项
1. 样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
4. 实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
5. 酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
6. 建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
7. 牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。
10. 为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
