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    昆虫体内酵母类共生菌的形态观察

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    实验试剂

     

    1. 样品包埋剂选用Leica CM1900 冷冻切片机配套包埋剂(OCT-compound)

    2. 结晶紫，组织染色选用常规染色剂

    3. 二甲苯(进行组织切片的脱水和透明处理)

    4. 香柏油(油镜观察用)

    实验设备

     

    1. Leica CM1900 冷冻切片机(Leica Microsystems Nussloch GmbH， German) 切片厚度范围为0～50μm ，箱体最低控制温度为-40 ℃，切片头最低控制温度为- 50 ℃

    2. Leica S8 APO 连续变倍实体显微镜(Leica Opti-tech Scientific Inc.， Ger rman) 物镜配置为0.63 ×、1 ×、2 ×，目镜配置为10 ×和25 ×，变倍系数为0～8.0

    3. Leica DMLS2 正置生物显微镜(Leica Opti -tech Scientific Inc.， Ger rman ) 。物镜配置为5 ×、10 ×、20 ×、40 ×和100 × (油镜) ，目镜配置为10 ×和25 ×

    4. Leica DFC320 数码摄像系统(Leica Opti-tech Scientific Inc. ， Ger rman) ，分辨率3 300 000像素。可与Leica S8 APO 连续变倍实体显微镜和Leica DMLS2 正置生物显微镜配套，利用IPP 软件( Image-Pro Plus version 410； Media Cybernetics， Inc. Georgia Avenue Silver Sp ring， MD，USA) 进行组织冷冻切片的显微摄像

    5. 载玻片(若干)

    6. 吸水纸

    7. 擦镜纸

    实验材料

     

    褐飞虱雌成虫，长期在感虫品种水稻上连续继代饲养的实验种群。

    实验步骤

     

    1. 冷冻切片

        (1) 从供试的褐飞虱实验种群中随机采集怀卵的雌成虫(以腹部膨大为准) 300 头，置于- 20 ℃冰箱中备用。

        (2) 每次随机取10 头成虫，解剖镜(Leica S8 APO； Leica Opti-tech Scientific Inc. ， Ger rman) 下分别取头部、胸部和腹部进行冷冻切片。冷冻切片厚度为5～7μm，冷冻切片机箱体温度设置为- 30 ℃，切片头温度设置为- 40 ℃。

        (3) 样品放于切片托(直径30 mm) 上，置于冷冻切片机样品架上预冷30 min后切片。组织切片自然粘贴于载玻片上，每张载玻片上放置20～30 个样本切片用于显微观察。

    2. 结晶紫染色

        (1) 每张粘贴有虫体组织切片的载玻片在酒精灯上加热固定5 s；

        (2) 二甲苯脱水；

        (3) 透明处理2～3 h；

        (4) 再次加热固定5 s后用结晶紫染色3～5 min；

        (5) 自来水冲洗10 min后吸水纸吸水、风干；

        (6) 玻片风干后在显微镜下观察、拍照，以明确褐飞虱虫体内酵母类共生菌的形态特征和存在部位。

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