无菌感染期线虫的诱导培养
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实验试剂
1. 琼脂糖（Agarose），进口分装，上海Yito公司；
2. 胰蛋白胨（bacto-tryptone）、酵母浸出粉（bacto-yeast extract），英国OXOID公司；
6. 80％甘油：称取100.8 g甘油（密度为1.26 g/cc）于20 mL 双蒸水中，高压灭菌15 min，室温保存。
实验设备
3. 高速冷冻台式离心机，Heraeus Sepatech公司；
6. GB 1302型天平，Mettler-Toledo仪器（上海）有限公司；
7. C-90-1型电热恒温水浴锅，广州市越秀区医疗器械厂；
9. YXQ.WY21-600IIR卧式高压蒸汽消毒器，广州市医疗设备厂；
实验材料
1. 小卷蛾斯氏线虫 S. carpocapsae A24品系；
实验步骤
2. 无菌感染期线虫S. carpocapsae A24的获得
上述线虫培养30天后，进行体表消毒，即可获得无菌感染期线虫。具体方法如下：
2) 移去滤布、筛网和网内的海绵及培养基等杂质，静沉后，倾去上层液, 加入无菌水清洗线虫6～7次，每次约15 min；
3) 将线虫液转入三角瓶中，以0.5%硫酸链霉素室温，100 rpm，振荡消毒6h，以保证抗菌素充分接触线虫；
4) 用无菌水清洗线虫6～7次，再用无菌乐百氏水清洗线虫至少2次，每次约15 min；
5) 最后得到无菌的感染期线虫悬液100 mL～200 mL，稀释到一定浓度，分装若干瓶；
6) 取样计数，计算出每毫升悬液中的线虫含量，于4℃摇床中保存；
7) 取200 μL线虫悬液滴入100 mL LB培养基中，100 rpm振荡，检测带菌情况。取少量线虫液滴到LB平板上，检测带菌情况。
1) 取-80℃共生细菌 X. nematophila A24 甘油储存菌20 μL于200 mL在LB平板上划线，25℃，培养48 h；
2) 从LB平板上挑取单菌落接种至4 mL LB液体培养基中，25℃，200 rpm，振荡培养36 h。将活化菌按3％接种量转接至200 mL培养基中，振荡培养36 h；
3) 将菌培养液置于15 mL无菌的离心管中，4℃下，6000 rpm 离心15 min；
5) 于6＃细胞培养板中，分别加入3 mL菌过滤液，再加入100 μL无菌感染期线虫，25℃约100 rpm下诱导恢复10 h；
7) 将处理的线虫吸到经DEPC水处理过的无菌离心管中，离心（25℃，2000 rpm，1 min），吸弃上清；
8) 加适量的0.2%DEPC水清洗线虫，离心（25℃，2000 rpm，1 min），重复清洗4次；
9) 将清洗最后一次的线虫转入已称量的无菌离心管内，再称量算得线虫的体积，将离心管放入烧杯，加液氮，-80℃贮存。
