线虫寿命曲线应该如何制作

秀丽线虫进入成虫期开始产卵后，每天将秀丽线虫转移至新的培养基上。待10d后每天记录秀丽线虫的存活、死亡和丢失的数量。死亡判定标准为铂金丝轻轻碰触秀丽线虫半分钟不动则为死亡；当秀丽线虫在培养皿壁上干 、体内有子代孵化导致死亡的排除在外不计入死亡数内。收集每日数据，绘制寿命曲线

线虫的生命曲线，横坐标是线虫的生长的日期，即天数，纵坐标是指在一个培养皿里，大概有百分之多少的虫子还是活着的。

将同步化得到的线虫转移到上述加了FUDR或叶绿素代谢物Pa的培养基中，确保每个培养基转移30条线虫。培养至成虫，各组曝光处理后。每隔2-3天将线虫转移到相应加了FUDR或叶绿素代谢物Pa的新皿中防止培养基污染。对于钻到培养基底部、爬在皿壁上失水致死、无顾丢失等情况不计入死亡数据，但将其记为实验对象并进行统计分析。寿命实验分析用在线应用（OASIS进行统计分析，上述实验独立重复三次。

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实验结果显示，在光照条件下，浓度为0.8 μM Pa 对秀丽隐杆线虫寿命延长效果最显著，平均寿命达到了18.99天，延长了将近18%。如附图1 、2 还有表格所所示。不同浓度Pa下有无光照对野生型秀丽隐杆线虫寿命

游泳速率

1.同步化线虫：将发育至day 1的可产卵线虫置于培养基中培养过夜，10 h后去除母虫得到同一时期的线虫，20 ℃培养箱培养至线虫发育到young adult时期进行转移。

2.线虫处理

3.对线虫叶绿素

4.对线虫给予叶绿素代谢物Pa和光照处理（LWL+Pa）。每隔2-3天转移一次线虫防止培养基污染

3.线虫计数：为了测量在液体中的游泳速率，将第1天和第11天的线虫转移到M9缓冲液中。计录30秒内身体摆动的次数，线虫身体中部歪曲方向改变即为一次摆动，每组线虫需检测20条线虫。实验均重复3次。

摄食速率：

1.线虫同步化及处理

2.线虫计数：用解剖显微镜观察第1天和第11天线虫咽部蠕动

叶绿素代谢物Pa对线虫应激能力的影响实验步骤

热应激抵抗

1.同步化线虫

2.线虫处理：培养至成虫，各组曝光处理后。将每组120条线虫从20°C的培养箱转移到37°C的培养箱中进行7小时的热处理。之后每隔2小时检查线虫生存状况，用铂丝轻轻触碰线虫，等待5秒后将没有反应的线虫计为死亡。

3.寿命统计：使用OASIS进行统计分析，此实验至少重复两次。

氧化应激抵抗

1.同步化线虫

2.线虫处理：培养至成虫，各组曝光处理后。最后将所有线虫转移到含有10 mM t-BOOH的培养基中处理24小时，每隔4小时监测一次线虫存活率。

3.寿命统计

渗透应激抵抗

1同线线虫

2.线虫处理：培养至成虫，各组曝光处理后。将所有线虫转移至预先配制好的含有400 mM NaCl的培养基中持续处理 48小时后监测存活率。每隔4小时计录线虫的死亡率，线虫未能对柔和的触感做出反应即可认定为死亡。

3.寿命统计：分析线虫存活率，重复测定两次以上。