植物原生质体的分离和融合
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实验原理
实验试剂
1480.0mg/L 两个结晶水的氯化钙(CaCl2 2H2 O)
实验设备
350目网,离心机,试管,离心管,吸管,显微镜,恒温水浴锅。
实验材料
实验步骤
1. 将撕去表皮的植物叶片或花瓣置于酶液(pH 6.9,去表皮面接触酶液),在25℃黑暗条件下,酶解1~2小时。
3. 在1000rpm条件下离心5分钟,弃上清液。 红辣椒800转/分离心5分钟。加入3~4ml13%CPW洗液,相同条件下离心 ,弃上清液。加1ml13%CPW洗液悬浮。
1)用细口吸管吸20%蔗糖溶液约3ml,小心插入盛有原生质体悬液的离心管底部,缓缓将蔗糖溶液挤出,由于比重不同,蔗糖溶液与原生质体悬液中间有一明显界面(注意要有明显界面).
2) 离心5分钟(1000转/分,辣椒800转/分),此时死细胞及碎片降至蔗糖溶液内,聚集在离心管底部,而活细胞由于有大量泡沫,故漂浮在上下界面处,
1. 不同的原生质体各300μl与带盖离心管中,另加入300μl 40% PEG液,30℃水浴中温浴15min;