乙醇固定样品DNA 抽提和直接PCR
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实验原理
Omega Bio-Tek 相应试剂盒既能够快速有效的抽提得到乙醇保存多年的样品基因组DNA,又可以利用直接PCR 系统,快速的对乙醇保存样品进行PCR 鉴定,为您的研究提供最有力的工具。
实验材料
实验步骤
1. E.Z.N.A. Tissue Direct PCR kit
1) 分别取45ul AT1 和5ul AT2 到0.2ml PCR 管中,混合均匀。对于有较多样品需要操作的,可以先将AT1 和AT2 用量计算好,混合均匀后再分装到每一管中。
2) 取鱼苗一条,在AT4 中浸泡约5-10min,滤纸吸干水份。
3) 将鱼苗浸没在上一步准备的AT1 中56℃水浴或者PCR 仪上消化10-20min,中间可以涡旋混匀一次。
4) 消化完后的PCR 管置于90℃水浴或者PCR 仪上5min,稍微冷却后加入50ul AT3 涡旋混匀。
5) 以上裂解液就可以作为PCR 的模板直接使用,PCR 体系中建议加入5ul 左右。
6) 取5ul E.Z.N.A. Tissue Direct PCR kit 抽提得到的一条鱼苗的DNA 作为模板,客户提供的引物Y-30-R/F 作为引物,PCR 扩增。
94℃ 30S 52℃ 30S 72℃ 40S 33cycles;
2. E.Z.N.A.® MicroElute® Genomic DNA Kit
1) 称量10mg 组织,加入200ul Buffer TL;
4) 加220ul Buffer BL 涡旋混匀,70℃孵化10min;