质粒DNA提取技术
互联网
2228
实验原理
实验试剂
实验设备
实验材料
实验步骤
1. 将25mL含氨苄青霉素（100μg/mL）的LB液体培养基加入100mL锥形瓶中，接入含R-pGEX-4T-1质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。
2. 收菌，吸取1.5mL培养物加入1.5mL离心管中，4000r/min室温离心2min。
4. 将细菌沉淀悬浮于100μL溶液Ⅰ中，充分混匀，室温放置10min。
5. 加入200μL溶液Ⅱ(新鲜配制)，盖紧盖子，混匀内容物，将离心管放冰上5min。
6. 加入150μL溶液Ⅲ(冰上预冷)，盖紧盖子，颠倒数次使混匀。冰上放置15min。
7. 12000r/min离心15min，将上清转至另一离心管中。
8. 向上清中加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min离心5min，将上清转至另一离心管中。
9. 向上清中加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。
10. 12000r/min离心5min，倒去上清液，将离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
11. 用1mL70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡，12000r/min离心5min，倒去上清液，空气干燥。
12. 加20μL纯水(含20μg/mL胰RNA酶)，使质粒DNA完全溶解，－20℃保存。
