siRNA对照解析

A．普通阴性对照  

 

1.siRNA实验应该有阴性对照；

 

2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照；

 

3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性；

 

4．阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。

 

B．荧光标记阴性对照  

 

1. RNAi negative control与哺乳动物基因无同源性；

 

2.通过标记荧光，可以方便地在荧光显微镜下观察转染情况；

 

3.可用于优化转染条件和评价转染效率；

 

4.具备很好的pH耐受性，在活细胞中更稳定。

 

C．siRNA阳性对照  

 

阳性对照作为一个实验系统检查是很重要的。您可以利用阳性对照来确认RNAi实验中转染、RNA提取和基因表达检测方法是可靠的。

 

siRNA阳性对照较为常用的如下：

 

1  LaminA/C

 

2  GFP22

 

3  Luciferase GL2

 

4  MAPK1

 

5  Beta-Actin

 

6  Vimentin

 

7  P53

 

8  GAPDH

 

9  Cyclophilin B

 

D．转染试剂对照  

 

对于一个完善的对照系统，转染试剂对照(Mock transfection )是不可缺的。转染试剂对照可以检测转染试剂对细胞的毒性、细胞的成活率等细胞转染的各个因素影响。

 

E．避免Off-target对照

 

对于RNAi研究来说，在哺乳动物中，off-target效应是一个十分关注的问题。有大量的报道，一个siRNA影响多个基因的表达。因此，大量研究关注于用针对同一个基因的不同区域的多个siRNA进行实验，然后分析各自对基因表达效果的影响。理想的结果是针对不同区域的siRNA对同一个靶基因产生相似的干扰效果。