高效液相色谱的流动相

液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、 流动相溶剂的选择
高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行：溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求；溶剂应当不干扰检测器的工作；在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。对液相色谱溶剂的要求：
1）溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2）溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3）溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4） 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5） 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。

液相色谱流动相溶剂的选择步骤

选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等

选择合适洗脱强度的溶剂：简单样品，2 ≤ k'≤ 5；复杂样品，0.5 ≤ k'≤ 20

改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值

二、 表征溶剂特性的重要参数
1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度
溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比；而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。

在液相色谱常用混合溶剂作流动相。混合溶剂的P'具有加和性：
P'ab = ??aP'a＋?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
溶剂极性对容量因子的影响：
①正相色谱：k2' / k1' = exp [(P1'－P2')/2]
②反相色谱：k2' / k1' = exp [(P2'－P1')/2]
在液相色谱中, 一般溶剂的极性变化二个单位, 溶质的分配比差不多能有十倍的变化。
3）溶剂选择性分类

按溶剂分子的特殊作用类型（色谱选择性）进行分类, 采用三个不同的常数表示：
①Xe(接受质子参数)~易与含羟基的分子作用(如酸类、酚类)；
②Xd(给质子参数)~易与碱性化合物作用(如胺、亚砜等)；
③Xn(强偶极参数)~易与偶极距较大的溶质分子作用(如硝基化合物、腈、亚砜和胺类等)。
常用溶剂分成八组。同一组溶剂的三个选择性参数相近，其选择性相似。改变色谱选择性，应从相距较远的溶剂组挑选其他溶剂。
4) 流动相的优化
通过考察流动相组成对保留时间和分离因子等色谱参数的影响，获得最佳的分离选择性和较短分析时间。