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戴安P680型高效液相色谱仪(含自动进样器)使用操作规程

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1 按下稳压电源工作电源开关键至“ON”状态。依次接通P680型输液泵、ASI-100自动进样器、柱温箱、检测器、电脑。

2更换蠕动泵清洗瓶中5%的甲醇(如果仪器经常使用则建议每周更换两次,如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。)

3确认洗针瓶中的洗液是否太少,若太少,则需补充或更换。洗液一般为:50%的甲醇。

4 排泵内气泡

4.1拧松泵右侧的快速清洗阀(反时针两圈左右)。按下泵前面板右下方的“Purge”键, 排泵内气泡,仪器将以6.0 ml/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡,5分钟将自动停止。若想手动停止,则再按 “Purge”键,将停止清洗。

4.2 将每个需要使用的通道分别排完气泡后,拧紧快速清洗阀(顺时针拧紧,注意不要拧得过紧。)。

5系统联机

5.1检查确认密码钥匙已与计算机联结,鼠标左键双击桌面下方工具栏的“Chromeleon”图标,打开 [Chromeleon Server Monitor],点击[Start],待变色龙图标变成灰色,并显示Chromeleon Server is running idle时,关闭[Server Monitor]。

5.2 鼠标左键双击桌面的“Chromeleon”图标。双击右边方框中的HPLC-Graphics.pan, 点击泵模块下的“Settings”键,将跳出泵的设定窗口,设置完成后,按右下方的“Close”关闭该界面。点击自动进样器模块下的“Settings”键,将跳出进样器的设定窗口,设置完成后,按右下方的“Close”关闭该界面。点击检测器模块下的“Settings”键,将跳出一个泵检测器的设置窗口, 设置完成后,按右下方的“Close”关键该画面。

6序列进样

6.1新建一个程序文件

6.1.1依次点击File/New,选中“Program File”后,进入程序编辑向导界面。

6.1.2确认泵的工作方式(“Isocratic”等度分析、“Ramp”二元梯度分析、“Multi-Step Gradient”多元梯度分析)、合适的流动相通道及高/低压极限和流速。

6.1.3自动进样器的参数设置,每一个参数后面都有一个推荐值,一般不做改动。

6.1.4通道的选择,设定采集一个样时需要采集的时间段(Acquisition Time),也可以不从0分钟开始采集,也就是前面一段时间不采集信号。

6.1.5紫外信号的具体设置,设定检测波长,波长带宽,参比波长,参比波长带宽。一般设定带宽为1 nm,设定参比波长为600 nm,参比波长的带宽为1 nm。

6.1.6设定完成后浏览程序参数,编辑、修改不适合处,最后单击工具栏中的“保存”按钮,给新建的这个程序起一个名字,若要新建一个文件夹,可点右上方的新建文件夹,然后将这个程序文件放入其中。

6.2建立方法文件

6.2.1依次点击File/New,选中“Method File”后,进入方法编辑向导界面。方法文件是在进完样后采集到谱图进行处理数据时需要用到的,所以现在不需要做任何改动。不能够等谱图出来之后再去建方法文件。最好将它和刚才建的程序文件放在同一个文件夹里。

6.3建立新序列文件

6.3.1依次点击File/New,选中建序列文件“Sequence (using Wizard)”,后进入序列编辑向导界面。

.6.3.2设定样品信息

6.3.2.1设定样品名称,如果待测样品溶液名字一样,只是序号是按顺序递加的,可以在方框的空白处输入待测样品溶液名,并通过右边的三角箭头使用“sample Number”,让软件自动加上一个序号。 Number of 为待测样品溶液的个数。Injection per为每个待测样品溶液需要进样的次数。Start为第一个待测样品溶液放在自动进样器上的位置,如果所测的待测样品溶液是按顺序放在自动进样器上的,则输入第一个待测样品溶液的位置,软件会自动输入以下各个待测样品溶液的位置。Injection为进样体积。

6.3.2.2设定好后,按左下方的“Apply”后,可将待测样品溶液的信息在右方以列表的方式显示出来。

6.3.3设定对照品信息

6.3.3.1同设定样品信息。但有时候由于待测样品太多,花的时候较长,为了防止保留时间漂移,峰面积有变化,消除系统的误差等原因,需要采用间隔进样的方式进样。Variatio standards after each unknown意思为每进几个标准溶液后进几个待测溶液,再进个标准溶液后进几个待测样品溶液。

6.3.3.2设定好后,按左下方的“Apply”后,可将所有样品溶液的信息在右方以列表的方式显示出来,且标准溶液在前,待测样品溶液在后。

6.4点击图标进入浏览器“Browse”界面,找到编辑好的序列。在此界面可以对序列进行进一步的调整,增加或减少样品;改变样品名、样品类型、进样位置、进样量、分析程序、积分方法等参数,修改后保存序列。

6.5序列进样

6.5.1如果正在采集基线,则点工具栏中蓝色小圆点,停止采集基线,将跳出如下窗口:提示您是否保存刚才正在采集的基线谱图。如果要保存,则在“Save to sequence”前“√”后选择一个保存路径。通常是不保存的,则按右上方的“YES”键停止基线的采集。

6.5.2加入进样序列:击工具栏上“Start /stop Batch”(开始/停止批进样)键,将跳出一个窗口,如果方框中有不需要做的序列(如果有,一般为上次未做完的序列),则选中后,点右边的“Remove”键,将其移走。点右上方的“Add…”将需要进样的序列加入列表中。点击底下右方的“Ready Check”,检查设置好的程序、方法、序列有没有错误或仪器有没有准备好。如果显示有红色感叹号图标,则说明有错误。下图显示的信息为需要占有多大电脑空间和需要用掉多少流动相,没有其它错误信息。单击“ok”,完成检查。

6.5.3开始进样:单击“Start”,仪器将会自动根据软件中设定的先后顺序开始进样,直至所有的样品全部进样。若软件中相应的位置上并没有放置样品瓶,仪器将会自动识别,并跳过该样品进下一个样品。当第一个样品进完后,将会等待第二个样品进样,这时候保留时间(Retention Time)显示为0.00min。

7处理数据

7.1点击控制面板上的“Browser”进入需要处理数据的序列。

7.2选择定量方法点击方法文件“测试方法.qnt”。

7.2.1基本设置“Genernal”含量的单位后面输入最后的计算出来的量的单位,液相样品一般为浓度单位,固体一般要算百分含量。

7.2.2积分参数设定 “Detection”:Minimum Area:设定最小峰面积,一般设置0.01~10之间。低于设定值的将不会积分;Valley To Valley On:设置从峰谷到峰的积分;Inhibit Integration On:设定不积分段从什么时候开始不积分,Inhibit Integration Off:设定不积分段从什么时候结束不积分(ON和OFF是成对使用的。);Fronting sensitivity Factory: 前沿峰灵敏度因子,一般设为2~4为宜;Tailing sensitivity Factory:拖尾峰灵敏度因子,一般设为2~4为宜;Rider Threshold:肩峰值。设定为100%,两分不开的峰垂直分开单独积分。

7.2.3峰表(Peak Table)设置:在第一列中输入标样的名字;在第二列在输入相对应的保留时间;在第三列中输入一个正负范围,一般在设置值≤保留时间的5%;第四列为定量标准,一般为外标法(External);第五列为定量类型,一般以面积来定量(Area);第六列为校正类型a) 单点校正一般做样都是单点校正,所以选第一项:过原点的直线(Linear),b) 线性校正如果要做线性的话,就要选第二项:带截距的直线(Linear with Offset)。其它设置都不用改动。

7.2.4定量表(Amount Table)

7.2.4.1编辑列Edit Amount Column在表格的下方任何一位置点右键,选中“Edit Amount Column”,在“Assign standards on the”后面的下拉菜单中选择“Name”, 右边框中将会显示有几个标样。点击左边方框下的自动生成列“Auto Generate,a) 做线性的话就选择第一项(..separate..),表明要生成五个不同的列。b) 做单标定量的话选择第二项(..single..),表明生成一个列。在“Amount”列中输入标样的浓度。

7.2.5校正(Calibration)如果有一点误差较大(偏离直线较远),不想让它参与校正。比如说第一个点不想要,则将对应的“√”去掉,按确定即可。

7.2.6 保存刚才方法的更改。

8报告输出:在“Browse”界面下,打开序列,双击需要处理的标准样品文件,点击菜单“View/Printer-Layout”,进入需要打印的界面:类似于Excel电子表格,分好几页显示,第一页为基本谱图和数据(Integration);第二页为:单标的校正曲线(Calibration current peak),显示的有:线性图、相关系数(Corr….)、截距(offset)、斜率(slope)、相对标准偏差(RSD);第三页为:混标的校正曲线(Calibration Batch)一般用不上;第四页为:峰的分析。包括:基线噪音(Noise)、分离度(Resol.)、对称性(Asym.)、理论塔板数(Plates)等;第五页为:统计表(Summary).一般都需要打印;第七页为谱图的重叠(Overlay print)。选择合适的报告页面,打印输出。

9关机

9.1数据采集完毕后,在控制面板检测器设定中,关灯,然后断开仪器各部件的控制,关闭检测器。

9.2按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、管路、自动进样器、进样针。确保冲洗干净后,关闭各部分电源。

9.3退出色谱工作站,关闭电脑。

10.注意事项

10.1 泵

10.1.1如果流动相中没有电解质(即缓冲盐或酸等),最好用50%的甲醇冲洗约20~40分钟后就直接用甲醇或乙腈冲洗流路约20~40分钟。

10.1.2如果流动相中有电解质,需要先用5%的甲醇冲洗色谱柱约60分钟后,最好用50%的甲醇冲洗约20~40分钟后,再用纯甲醇或乙腈冲洗流路约20~40分钟。

10.1.3放置了一天或以上的水相或含水相的流动相如需再用,需用微孔滤膜重新过滤。

10.1.4蠕动泵清洗瓶中的5%的甲醇要求每周至少换二次。若液相使用频率不高,建议每天使用前更换,以免水长细菌损坏泵中各组件。

10.1.5为了保证P680的安全运行,必须设定高、低压极限(一般安装时已设置好);

10.1.6流动相禁止使用氯仿、三氯(代)苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等;慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等,以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。若需要使用正相系统分析样品,需要另行安装耐腐蚀的正相密封圈。

10.1.7拧松快速清洗阀时,不宜拧得过松。一般拧松2圈左右即可。拧得过松流动相容易从清洗阀部位流进泵头中引起报警。

10.1.8使用快速清洗阀时,只能一个一个通道的排气泡,不得将几个通道同时按比例排气泡,比例阀的快速切换易导致损坏。

10.1.9没有配制脱气机的,流动相一定要超声脱气。有脱气机的,泵电源开启后,等脱气机停止工作后再进行泵的其它操作。

10.2自动进样器

10.2.1自动进样器建议用50%的甲醇洗针。

10.2.2每天使用自动进样器进样前都要按一下控制面板上的“wash”键,仪器会自动排除定量环和针中的残留气泡。

10.2.3每天洗针前要检查一下洗针瓶中是否有洗液(50%甲醇)。

10.3 检测器

10.3.1检测器的紫外或可见灯在长期打开的情况下,一定要保证有溶液流经检测池。若不需要做样,可设置一个较低的流速(如0.05ml/min)或关闭灯的电源。

10.3.2检测器的灯一般是在流通池有溶液连续流动几分钟后才开的。如果流动池中有气泡,则会提示漂移过大无法通过自检和校正。

10.3.3检测器的氘灯或钨灯不要经常开关,每开关一次灯的寿命约损失30小时。若仪器经常使用,可几天开关灯一次。

10.4 整个系统

10.4.1缓冲溶液与有机溶剂互相转换前一定要用5%甲醇清洗泵,防止盐在有机相中结晶损坏泵中各组件。

10.4.2缓冲溶液的浓度不能高于0.5 mol/L,pH范围2~12,Cl-的浓度要小于0.1 mol/L(防止腐蚀流路)。

10.4.3仪器长时间不用,每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存,以免结晶或造成污染。

10.4.4待测样品或标样在流动相中一定要易溶,否则进样后会结晶造成定量不准确或堵塞色谱柱。

10.5软件

10.5.1不要轻易地在windows窗口下删除软件所在根目录或子目录下的文件,以免造成软件无法正常使用。

10.5.2仪器不使用时,密码钥匙不要经常拆来拆去,容易导致密码钥匙损坏。

10.5.3采集紫外信号时,若分析物质的最大波长已知,则尽量减少采集的通道个数,以免占用电脑的空间。

10.5.4软件系统的配置(Server Configuration)在软件安装完成后,不要改动。

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