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高效液相色谱仪(HPLC)的校正(3)

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   2.6、波长示值误差

  2.6.1、用注射器将紫外波长标准溶液(标准波长为235nm,257nm,313nm和350nm)从检测器入口注入样品池冲洗,并将池充满,将波长调到低于标准波长5nm处,到标准波长+4nm处,测得的最大吸收值处对应的波长与标准波长之差为波长示值误差;目前仪器可以在1ml/min的流量下,直接用空管连接检测器,每隔2min改变1nm,连续进标准样10ul,同样可得波长示值误差。

  2.6.2、可调波长紫外可见光检测器波长示值误差(此项只适用于HP1100高效液相色谱仪且带有HP工作站)。

  2.6.3、打开HP1100液相色谱仪和HP工作站,打开输液泵和检测器,用纯水冲洗系统直至稳定,进入Diagnosis窗口,点击氘灯图标,进入showmoduletests状态,点击VWDVLcalibrationtest点击start,系统自动进入校正状态,待校正完毕,将校正结果打印归档。

  2.6.4、可接受标准:λ≤2nm

  3、性能确认

  3.1、使用标准品或供试品,确认仪器性能符合使用要求;

  3.2、先进行色谱柱的性能确认,内容包括:分离度,对称因子,理论塔板数和峰面积标准偏差。

  3.3、液相色谱柱的确认

  3.3.1、测试标准样配制:称量1000mg苯酚,100mg联苯加入到100ml容量瓶中,移入邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯各1ml,然后用甲醇定容到100ml,混匀,从中移取1ml该溶液,用乙腈:水=70:30定容至100ml。

  3.3.2、方法:流动相为乙腈:水=70:30,流速为1.0ml/min,波长为254nm,温度为30℃,进样量为:10ul,运行10min。

  3.3.3、色谱柱:Extend-C18Analytical,5um,4.undefined250mm。

  3.3.4、连续进行5次分析,分离度均R>1.5;邻苯二甲酸二乙酯对称因子S在0.80~1.50范围内;邻苯二甲酸二乙酯柱效>3000m-1;邻苯二甲酸二乙酯峰面积的标准偏差应≤1.5%。

  3.4、按照性能确认方法逐步进行,并记录谱图;根据性能测试的结果,评价仪器是否符合性能要求。

  4、校正结果处理和校正周期

  4.1校正结果全部项目均符合技术要求者,判为合格,方可使用。若某些指标达不到要求,关于仪器情况,仪器负责人以维修报告的形式报于QC经理,由QC经理批准维修方案。

  液相色谱仪的校正周期为一年。

 

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