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高效液相色谱仪(HPLC)的校正(1)

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1963

    0.1、输液系统:

  0.1.1、梯度误差GC不超过±3%

  0.1.2、泵流量设定值误差Ss<±2%

  0.1.3、流量稳定性误差SR<±2%

  0.2、紫外检测器性能

  0.2.1、基线噪声不超过5×10-4AU,基线漂移不超过5×10-3AU

  0.2.2、定量测量重复性误差(6次进样)RSD≤1.5%

  0.2.3、最小检测浓度不超过1×10-7g/ml萘/甲醇溶液

  0.2.4、可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过±2nm(HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成)

  1、校正条件

  1.1、环境温度10-30℃,相对湿度低于65%

  1.2、校正设备

  1.2.1、秒表分度值小于0.1s

  1.2.2、分析天平最大称量200g,最小分度值0.1mg

  1.2.3、容量瓶

  1.2.4、微量注射器

  1.3、标准物质和试剂

  1.3.1、HPLC用甲醇、纯水,分析纯的丙酮

  1.3.2、1×10-4g/ml,1×10-7g/ml的萘甲醇溶液

  1.3.3、紫外波长标准溶液

  2、校正方法

  2.1、梯度误差GC的校正

  2.1.1、进行梯度洗脱程序,A溶剂为水,B溶剂为0.1%丙酮的水溶液,B经5个阶段从0变到100%,20%―40%―60%―80%―100%,重复测量两次,取平均值,求各段梯度误差Gci,取最大作为仪器梯度误差,公式:Gci=(Li―Lm)/Lm×100%

  Li:第i段信号值的平均值;Lm-:各段输出信号平均值的平均值

  可接受标准:-3%≤Gci≤3%

  2.2、泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的校正

  2.2.1将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好,以甲醇为流动相,按表一设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确的收集10-25分钟,称重,按下式计算流动相流量设定值误差Ss和流动相流量稳定性误差SR。公式:Ss=(Fm-FS)/Fs100%

  可接受标准:-2%≤Ss≤2%

  SR=(Fmax-Fmin)/F×100%

  可接受标准:-2%≤SR≤2%

  Ss:流量设定值误差(%);Fm=(W2-W1)/ρt.t:流量实测值(ml/min)

  W2:容量瓶+流动相的重量(g);W1:容量瓶的重量(g);Fs:流量设定值(ml/min);

  ρt:实验室温度下流动相的密度(g/cm3);t:收集流动相的时间(min);

  SR:流量稳定性误差(%);Fmax为同一组测量中流量最大值(ml/min);

  Fmin:同一组测量中流量最小值(ml/min);F为同一组测量值的算术平均值(ml/min)

 

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