高效液相色谱故障及排除方法高效液相色谱故障及排除方法

1）诊状可能的原因解决方法

　　(一)、保留时间变化

　　1.柱温变化柱恒温

　　2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

　　3.缓冲液容量不够用>25mmol/L的缓冲液

　　4.柱污染每天冲洗柱

　　5.柱内条件变化稳定进样条件，调节流动相

　　6.柱快达到寿命采用保护柱

　　(二)、保留时间缩短

　　1.流速增加检查泵，重新设定流速

　　2.样品超载降低样品量

　　3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向

　　4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀

　　5.温度增加柱恒温

　　(三)、保留时间延长

　　1.流速下降管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡

　　2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱

　　3.键合相流失同前(二)3

　　4.流动相组成变化同前(二)4

　　5.温度降低同前(二)5

　　(四)、出现肩峰或分叉

　　1.样品体积过大用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%

　　2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂

　　3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件

　　4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品

　　5.进样器损坏更换进样器转子

　　(五)、鬼峰

1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗

　　2.样品中未知物处理样品

　　3.柱未平衡重新平衡柱，用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)

　　4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配，用抗氧化剂

　　5.水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

　　(六)、基线噪声

　　1.气泡(尖锐峰)流动相脱气，加柱后背压

　　2.污染(随机噪声)清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂

　　3.检测器灯连续噪声更换氘灯

　　4.电干扰(偶然噪声)采用稳压电源，检查干扰的来源(如水浴等)

　　5.检测器中有气泡流动相脱气，加柱后背压

　　(七)、峰拖尾

1.柱超载降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相

　　2.峰干扰清洁样品，调整流动相

　　3.硅羟基作用加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品

　　4.同前(四)4同前(四)4

　　5.同前(四)35.同前(四)3

　　6.死体积或柱外体积过大连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管

　　7.柱效下降用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱

　　(八)、峰展宽

1.进样体积过大同

　　2.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散

　　3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点

　　4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

　　5.流动相粘度过高增加柱温，采用低粘度流动相

　　6.检测池体积过大用小体积池，卸下热交换器

　　7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱

　　8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小

　　9.样品过载进小浓度小体积样品