LC问题的诊断与解决
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诊状
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可能的原因
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解 决 方 法
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(一) 保留时间变化 |
1.柱温变化 | 柱恒温 |
| 2.等度与梯度间未能充分平衡 | 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 | |
| 3.缓冲液容量不够 | 用>25mmol/L的缓冲液 | |
| 4.柱污染 | 每天冲洗柱 | |
| 5.柱内条件变化 | 稳定进样条件,调节流动相 | |
| 6.柱快达到寿命 | 采用保护柱 | |
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(二) 保留时间缩短 |
1.流速增加 | 检查泵,重新设定流速 |
| 2.样品超载 | 降低样品量 | |
| 3.键合相流失 | 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 | |
| 4.流动相组成变化 | 防止流动相蒸发或沉淀 | |
| 5.温度增加 | 柱恒温 | |
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(三) 保留时间延长 |
1.流速下降 | 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 |
| 2.硅胶柱上活性点变化 | 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 | |
| 3.键合相流失 | 同前(二)3 | |
| 4.流动相组成变化 | 同前(二)4 | |
| 5.温度降低 | 同前(二)5 | |
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(四)
出现肩峰或分叉 |
1.样品体积过大 | 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% |
| 2.样品溶剂过强 | 采用较弱的样品溶剂 | |
| 3.柱塌陷或形成短路通道 | 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 | |
| 4.柱内烧结不锈钢失效 | 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 | |
| 5.进样器损坏 | 更换进样器转子 | |
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(五) 鬼峰 |
1.进样阀残余峰 | 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 |
| 2.样品中未知物 | 处理样品 | |
| 3.柱未平衡 | 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) | |
| 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) | 每天新配,用抗氧化剂 | |
| 5.水污染(反相) | 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 | |
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(六)
基线噪声 |
1.气泡(尖锐峰) | 流动相脱气,加柱后背压 |
| 2.污染(随机噪声) | 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 | |
| 3.检测器灯连续噪声 | 更换氘灯 | |
| 4.电干扰(偶然噪声) | 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) | |
| 5.检测器中有气泡 | 流动相脱气,加柱后背压 | |
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(七) 峰拖尾 |
1.柱超载 | 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 |
| 2.峰干扰 | 清洁样品,调整流动相 | |
| 3.硅羟基作用 | 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 | |
| 4.同前(四)4 | 同前(四)4 | |
| 5.同前(四)3 | 5.同前(四)3 | |
| 6.死体积或柱外体积过大 | 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 | |
| 7.柱效下降 | 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 | |
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(八) 峰展宽 |
1.进样体积过大 | 同(四)1 |
| 2.在进样阀中造成峰扩展 | 进样前后排出气泡以降低扩散 | |
| 3.数据系统采样速率太慢 | 设定速率应是每峰大于10点 | |
| 4.检测器时间常数过大 | 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% | |
| 5.流动相粘度过高 | 增加柱温,采用低粘度流动相 | |
| 6.检测池体积过大 | 用小体积池,卸下热交换器 | |
| 7.保留时间过长 | 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 | |
| 8.柱外体积过大 | 将连接管径和连接管长度降至最小 | |
| 9.样品过载 | 进小浓度小体积样品 |
