用GC－MS法分析柿树叶中的脂肪酸
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摘要:用乙醚－己烷混合溶剂抽提柿树叶中的脂肪酸，NaOH－CH3OH交换法甲酯化，毛细管柱FFAP作为分离柱，进行气相色谱－质谱法测定脂肪酸（以甲酯的形式）的组成。共分离出21种脂肪酸，鉴定出19种，占总含量的98.72％，其中以肉豆蔻酸（6.68％）、棕榈酸（30.00％）、硬脂酸（10.42％）、十六碳三烯酸（1.44％）、亚油酸（1.84％）、十八碳一烯酸（22.22％）、亚麻酸（1.25％）、花生酸（1.72％）、蜡酸（19.01％）为主。
关键词：柿树叶；脂肪酸；气相色谱－质谱
柿树叶为柿树科（Ebenaceae）植物柿树的叶，柿树为常绿或落叶乔木，生长在热带和温带[1]。在我国,柿树栽培面积约300万亩，主要分布在陕西、河南、山东和河北，占世界50％以上[2]。巨量的柿树叶资源，过去都作为燃料烧掉，或作为废料被抛弃，未得到开发利用。近几年国内外争先开发柿树叶制保健饮料,日本最近几年大量收购我国的柿树叶，制“桑叶柿叶”抗癌保健饮料，国内大量制做“灵芝柿叶茶”。但是，关于柿叶中各类化合物精细结构和含量的研究还未见报道，仅据“今日科技报”1994年4月22日报载：柿叶中含有机酸、挥发油、生物碱、还原糖、多糖、鞣质、酚类和香脂精等多种有效成分，柿叶中还富含治疗癌症的“黄酮甙类”化合物。作者意欲系统分析柿叶中各类化合物的结构和含量，现已用GC－MS方法分析了柿叶中的挥发成分及含量,研究了柿叶中“黄酮甙类”化合物的提取和精制。本文仅介绍柿树叶中脂肪酸组成的分析结果。样品测试过程使用FFAP极性弹性石英毛细管柱，GC－MS法测试[3，4],计算机数据处理方法，共分离出21个组分，鉴定出19种脂肪酸，其中以肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、十六碳三烯酸、亚油酸、亚麻酸、十八碳一烯酸、花生酸、蜡酸为主。该结果为柿树叶的综合利用、研制保健饮料提供了科学依据。
1实验部分
1.1仪器和试剂
仪器：HP5790A－VG7070E－HF色谱－质谱联用仪，PDP－11/250数据处理系统。
试剂：乙醚、正己烷、甲醇、NaOH、无水Na2SO4，均为分析纯。
1.2样品和脂肪酸的提取及衍生
1.2.1样品柿树叶采摘自河北省保定市区，秋季落叶时的鲜叶，用自来水洗净，凉干。
1.2.2脂肪酸的提取及衍生取0.5g干叶研磨成细粉，置于10mL试管内，用9mL乙醚－正己烷混合溶剂（体积比2:1），分3次浸提，每次30min，合并提取液，滤除残渣，将提取液浓缩至2mL后，加入0.5mol/L的NaOH甲醇溶液1mL，充N2，于30℃衍生12h，加蒸馏水分层，分出上层溶液，用无水Na2SO4干燥后待分析。
1.3GC－MS分析条件
取上述处理好的溶液1μL，进行毛细管气相色谱－质谱分析。FFAP弹性石英毛细管柱（16m×0.32mm）的分析条件采用柱温程序，初始温度60℃，停留3min，然后以15℃/min的速率升温至150℃，再以6℃/min的速率升温至220℃，恒温20min；进样室温度240℃;传输管道温度220℃；载气为He，柱前压34.5kPa。采用不分流进样。质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，电子倍增器1700V；溶剂延迟4min。甲酯化柿叶脂肪酸的总离子流色谱图见图1。(略)
图1为FFAP柱分离出的柿树叶中脂肪酸甲酯的总离子流色谱图（TIC），分离出21个组分，从图中结果看分离效果较好。由各峰对应的质谱图，经计算机检索及与标准谱图对照[5]，确定出各脂肪酸的组成。共鉴定出19种脂肪酸，用峰面积归一化法测定它们的相对含量为（98.72％），结果见表1。
表1 柿树叶中的脂肪酸组成及相对含量
|
Peak |
Fatty acid |
Code name |
Relative |
Molecular |
Relative |
|
No |
|||||
|
1 |
Valerica.(缬草酸) |
C5:0 |
116 |
C6H12O2 |
0.52 |
|
2 |
Laurica.(月桂酸) |
C12:0 |
214 |
C13H26O2 |
0.42 |
|
3 |
8-Nonynoica.(壬炔酸) |
C9:1(8) |
168 |
C10H16O2 |
0.13 |
|
4 |
Myristica.(肉豆蔻酸) |
C14:0 |
242 |
C15H30O2 |
6.68 |
|
5 |
6-Nonenoica.(壬烯酸) |
C9:1(6) |
170 |
C10H18O2 |
0.48 |
|
6 |
Palmitica.(棕榈酸) |
C16:0 |
270 |
C17H34O2 |
30.00 |
|
7 |
Margarica.(十七烷酸) |
C17:0 |
284 |
C18H36O2 |
0.97 |
|
8 |
Stearica.(硬脂酸) |
C18:0 |
298 |
C19H38O2 |
10.42 |
|
9 |
Hexadecatrienoica.(十六碳三烯酸) |
C16:3 |
264 |
C17H28O2 |
1.44 |
|
10 |
Linoleica.(亚油酸) |
C18:2(9,15) |
294 |
C19H34O2 |
1.84 |
|
11 |
Nonadecanoica.(十九酸) |
C19:0 |
312 |
C20H38O2 |
1.36 |
|
12 |
Linolenica.(亚麻酸) |
C18:3(9,12,15) |
292 |
C19H32O2 |
1.25 |
|
13 |
10-Octadecenoica.(十八碳烯酸) |
C18:1(10) |
296 |
C19H36O2 |
22.22 |
|
14 |
Arachidica.(花生酸) |
C20:0 |
326 |
C21H42O2 |
1.72 |
|
16 |
10,13,16-Nonadecatrienioica.(十九碳三烯酸) |
C19:3(10,13,16) |
306 |
C20H40O2 |
0.32 |
|
17 |
11,14,17-Eicosatrienoica.(二十碳三烯酸) |
C20:3(11,14,17) |
320 |
C21H36O2 |
0.25 |
|
19 |
Tetracosanoica.(二十四酸) |
C24:0 |
382 |
C25H48O2 |
0.18 |
|
20 |
Pentacosanoica.(二十五酸) |
C25:0 |
396 |
C26H52O2 |
0.50 |
|
21 |
Cerotica.(蜡酸) |
C26:0 |
410 |
C27H54O2 |
19.01 |
由分析结果(表1)可知，柿树叶中含饱和脂肪酸11种，占总含量的70.78％，其中以肉豆蔻酸（6.68％）、棕榈酸(30.00％)、硬脂酸（10.42％）、花生酸（1.72％）、蜡酸（19.01％）为主；含不饱和脂肪酸8种，占总含量的（27.93％），以十八碳一烯酸(22.22％)、亚麻酸（1.25％）、亚油酸（1.84％）、十六碳三烯酸（1.44％）为主。柿树叶中含有的亚麻酸及亚油酸，具有较高的营养价值。据一些资料报道，亚麻酸（ω－3型不饱和脂肪酸）对心血管病有防治作用，亚油酸是人体的必需营养成分。分析结果表明柿树叶具有药用价值，故可认定对柿树叶大量开发利用是可行的。
参考文献：
[1]贺士元.北京植物志：下册[M].上海：上海出版社，1988.728.
[2]中国科学院西北植物研究所.秦岭植物志：第1卷第4册[M].北京：科学出版社，1983.58.
[3]吴惠勤，程�青，张桂英.GC/MS法分析鳗鱼骨油[J].分析测试学报，1995,14（5）:28.
[4]刘鹏岩，郭志峰，安秋荣.马齿笕及其籽中脂肪酸的比较研究[J].分析测试学报，1995，14
（5）:70.
[5] HELLER S R, MILNE G W A. EPA/NIH mass spectral data base: v 1－4[M]. Washington: USGPO, 1978.
