临床药学实验

一、药物制剂配伍变化

【实验目的】

1． 通过液体药剂和注射剂配伍变化的观察，进一步了解配伍变化的发生原因。

2． 熟悉配伍变化处方的处理方法。

【实验原理】

在药剂的应用和生产工作中，经常遇到由于成分配伍不当而造成严重的制品质量事故，尤其在现代临床医疗及抢救工作中经常联合使用注射液，这些注射液具有不同的理化性质与药理作用。因此，合并用药有时是产生良好作用，是治疗所必需的，但有时可能产生不良作用，甚至产生药源性疾病。

药物配伍变化的类型大致可分为疗效学配伍变化与物理化学配伍变化。其中物理化学的配伍变化可分为可见性和不可见性配伍变化两大类，这些配伍变化多数在配伍之后立即发生变化，但也有一些要在数小时，甚至数天后才出现。可见性配伍变化主要指两种注射液混合后出现浑浊、沉淀、结晶、变色等现象；不可见性配伍变化主要指一些注射液中的药物在与其他注射液或输液配伍后，由于pH值改变或其他原因，使药物在应用期间分解，而失去部分效价，这种现象虽肉眼观察不到，但危险性同样是严重的，必须采取措施加以避免。

【试剂与器材】

1． 试剂药品　樟脑醑，盐酸小檗碱，10%水杨酸钠，1%双氧水，1%亚硫酸钠，2.5%氨茶碱，20%磺胺嘧啶钠，12.5%氯霉素，5%盐酸四环素，2%维生素C，0.25%碘解磷定，1%亚硫酸氢钠，1%EDTA，活性炭，滑石粉，纯化水。

2． 器材　架盘天平、试管、乳钵、烧杯、玻璃棒、量杯、量筒，滤纸等。

【实验方法与步骤】

（一）物理性配伍变化

1． 取樟脑醑1ml，加纯化水1ml，现象为 　　   。另取樟脑醑1ml，搅拌下逐滴加入50ml纯化水中，现象为   　　 。

2． 盐酸小檗碱0.05g，加纯化水至50ml，此溶液   　 颜色。另取上述溶液20ml加活性炭0.5g，搅匀后干燥滤纸滤过，滤液显　　　颜色。另取20ml上述液体加滑石粉0.5g搅匀，用干燥滤纸滤过，滤液显　　　颜色。

（二）化学性配伍变化

按下表操作与记录并解释实验现象。

（三） 注射剂配伍变化

按下表操作与记录并按组分析实验现象。

【注意事项】

1． 配伍变化的发生与否，常受到配合量、配合顺序、温度及pH值的影响，实验中应予以考虑。

2． 注射剂往往浓度低，配伍变化发生时，有些现象肉眼不容易观察，实验中应认真、仔细地观察实验现象。

二、氨茶碱注射液血药浓度测定

【实验目的】

1． 熟悉氨茶碱血药浓度的测定方法和血清中茶碱的提取方法。

2． 了解双波长分光光度法在血药浓度测定中的应用。

【实验原理】

吸收光谱重叠的a，b组分共存时，若要测定b组分，利用双波长分光光度法能消除a组分的干扰。其方法是选取二个波长λ1和λ2，使组分a在这两个波长处的吸收度相等；而对欲测b组分，在两波长处的吸收度有显著差别。用这样两个波长测得混合物的吸收度之差△A，只与b组分的浓度成正比，而与a组分浓度无关。因此，可以消去a的干扰。

氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱和乙二胺结合而成。其在体液中很快分离出茶碱，在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提出茶碱。并同时沉淀血清蛋白；再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出。在λ274和λ298处测定碱性提取液的吸收度（A），A274为茶碱和本底（溶剂、血清）吸收度，A298为本底的吸收度，茶碱的吸收度为△A=A274-A298，即可测定氨茶碱血药浓度。

【实验对象】

家兔。

【试剂与器材】

1． 试剂药品　氨茶碱注射液，茶碱标准品，5%异丙醇氯仿溶液（取异丙醇25ml加到475ml氯仿中）。0.1mol/LHCl溶液，0.1mol/L NaOH溶液。

2． 器材　紫外分光光度计，离心机，注射器，吸管，试管，刀片等。

【实验方法与步骤】

1． 动物准备及给药　取体重2.5～3kg健康家兔1只，一耳缘静脉注射氨茶碱15mg/kg（2min注完），另一耳用锐利刀片切割取血。

2． 取血　给药后0min、10min、20min、30min、60min、120min、180min、300min、420min采用耳静脉切割法分别取静脉血2ml。

3．茶碱标准曲线制作　取5支刻度试管，依次加入茶碱标准液20μl、40μl、60μl、80μl、100μl，各加入0.1mol/LNaOH溶液4.0ml，终浓度依次为0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml，以0.1mol/LNaOH溶液为空白，于274nm、298nm处测定吸收度，绘制ΔA～C曲线。

4． 血药浓度的测定　吸取血清0.5ml至刻度试管中，加0.1mol/LHCl溶液0.2ml，5%异丙醇氯仿溶液5ml，振摇、混合，离心（2500r/min）10min，吸取氯仿液（下层）4.0ml置另一试管中，加入0.1mol/LNaOH溶液4.0ml，摇匀，离心（2500r/min）10min。吸取碱液（上层）3～3.5 ml，以0.1mol/LNaOH为空白，于274nm、298nm处测定吸收度，计算ΔA。

5． 将测得血清样品的△A代入标准曲线的方程，求得相应的C。

【注意事项】

1． 紫外分光光度计使用前需预热30min并激发氢灯。

2． 振摇混匀药液时防止溅出并准确加样。

3． 样品离心前需配平。

4． 测量时若更换波长，必须重新调节0和100％。

三、尿药浓度法测定核黄素片的消除速度常数

【实验目的】

1． 熟悉尿药法计算消除速度常数的方法。

2． 了解尿药法在药物动力学实验中的应用。

【实验原理】

药物的体内过程包括吸收、分布、代谢、排泄等过程，其中每一过程既有区别，又有联系，观察一个方面的变化，常可间接地认识另一方面的情况。所以药物在体内的速度过程变化规律，既可用血药浓度法来估算，也可用尿药浓度法来估算。

药物从体内排泄的途径，主要为肾排泄。尿中药物的排泄不是以恒速进行，而是与血药浓度成正比的一级速度过程。在多数情况下，尿药浓度高于血药浓度，而且尿药法定量分析精密度好，测定方法较易建立，取样方便，用药对象可免受多次抽血的痛苦。因此，在药物服用后，有较多原形药物从尿中排泄的条件下，通常可用尿药浓度法估算消除速度常数、生物半衰期等动力学参数。尿中原形药物经肾排泄的速度过程，可表示为：

             =KeX  　　28-1　　

Ke为一级肾排泄速度常数，Xu为t时间排泄于尿中原形药物累积量，X为t时间体内药物量。

若静脉注射给药时，体内药量的经时过程可表示为：

             X=Xoe-kt                                                  28-2　　

Xo为给药剂量，K为一级消除速度常数。

将28-2式中X值代入28-1式后得：

            =KeXoe-kt                                               28-3　　

两边取对数得：

             lg     =lgKeXo-                      28-4　　

由28-4式可知，原形药物排泄速度的对数对时间作图为一直线，该直线的斜率为-              ，与血药浓度的对数对时间作图所得的斜率相同。通过直线斜率即可求出药物的消除速度常数。

若口服给药，则体内药量经时过程可由下式表示：

             X=         （e-Kt-e-Kat）                                    28-5　　

Ka为一级吸收速度常数。

尿中原形药物的瞬时排泄速度可用28-5式代入28-1式得：

            =           （e-Kt-e-Kat）                                28-6　　

当Ka>K，t充分大时，则e-kat→0，28-5式简化为：

            =           e-Kt                                         28-7　　

两边取对数得：

   lg        =lg                -                              28-8　　

由以上关系式可知，若以lgdXu/dt对t作图，可得到一条二项指数曲线，从其后段直线的斜率可求出一级消除速度常数K。

由于尿中原形药物排泄速度的瞬时变化率是不可能用实验方法测出的，通过实验只可求出平均尿药排泄速度，设在某段时间间隔Δt内原形药物的排泄量为ΔXu，则平均排泄速度为    ，如中点时间为tc，这样28-4或28-8式可改写如下：

    lg      =lgKeXo-            tc                                   28-9　　

    lg      =lg             -          tc                             28-10　　

这样以lg       →tc作图,由于实验中采用平均排泄速度代替瞬时排泄速度，求得的消除速度常数K会出现较大的误差。但若以相同的时间间隔集尿，其时间间隔不超过一倍的药物的半衰期时，则仅产生2%以内的偏差。

【试剂与器材】

1． 试剂药品　核黄素片，冰醋酸，保险粉等。

2． 器材　紫外分光光度计，烧杯，试管，量筒，量杯等。

【实验方法与步骤】

1． 服药及尿样收集

（１）服药前一天收集24h尿液，每次收集尿液后量体积，取10ml保留，其余倒掉。

（２）服药前排空小便，早餐后立即服用核黄素片三片（15mg），用温水吞服不嚼碎，记录服药时间。

（３）药片服用后，按服药时间第2、4、6、8、10h收集尿液，用量筒量取并记录尿液体积，然后，将尿液倒入盛有0.2ml冰醋酸的刻度试管内至20ml，摇匀，于阴凉避光处保存。

2． 尿液中核黄素含量的测定

（１）标准溶液的制备

精密称取105℃ 干燥2h的核黄素对照品50mg于500ml容量瓶中，加0.02mol/L醋酸液稀释至300ml，置水浴加热溶解后，放冷至室温，用0.02mol/L醋酸液稀释至刻度，摇匀即得，每1ml中含核黄素100μg，然后加入甲苯覆盖上面，置凉暗处保存。

（２）标准曲线的制备

精密吸取标准液0.1ml、0.3ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml分别置于10ml容量瓶中，用酸化蒸馏水（每100ml蒸馏水中含1ml冰醋酸）稀释至刻度，摇匀。以酸化蒸馏水作空白，用紫外分光光度计，在444nm波长处测定吸收度。然后，在每管中各加保险粉约3mg，摇匀。在1min内再次测定吸收度。两次测定值之差，即为核黄素的吸收度，以此值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（３）尿样中核黄素含量测定

尿样测定照标准曲线制备项下的方法。从“以酸化蒸馏水作空白”起，依法测定吸收度，以两次测定值之差，从标准曲线上查出尿液中核黄素的含量。

以上操作步骤，均须注意避光。

3． 数据记录与结果

（１）结果记录

服药后尿液收集与测定数据如下：

（２）绘制尿药排泄速率曲线。

（３）由曲线后段直线部分计算斜率，从而计算消除速度常数K及生物半衰期。

（４）计算总排泄量（mg），排泄百分率。

【注意事项】

1． 每次收集尿液后饮200ml左右水以维持尿量。

2． 每次大便时收集小便，切勿损失。

3． 试验期间（包括服药前一天）控制饮食，不能吃含有核黄素的食物，如蛋类、牛奶、奶糖等。并不得服用含有B族维生素的药品。

4． 实验中测完A1后，加入保险粉时，核黄素被还原为双氢核黄素，此时测A2应在一分钟内进行，以防空气中的氧将双氢核黄素氧化而影响测定结果。

  　思 考 题

1. 芸香甙有哪些性质？从槐米中提取芸香甙的原理是什么？

2． 阿司匹林制备时，向反应液中加入少量浓硫酸的目的是什么？是否可以不加？为什么？

3． 阿司匹林精制时，选择溶剂的依据什么？为何滤液要自然冷却？

4． 注射剂配伍变化发生的原因有哪些？简要说明处理原则。

5． 液体制剂按分散系统可分为哪几类？说明每一类的特点。

6． 甲酚皂溶液制备时加速皂化反应的方法有哪些？

7． 优良的混悬剂应达到哪些质量要求？

8． 决定乳剂类型的因素是什么？简述乳剂不稳定的表现。

9． 药物制剂稳定性的研究范围包括哪些？

10． 影响药物制剂稳定性的因素有哪些？制备维生素C注射液时，如何防止其氧化？

11． 为何要在两个波长下测定茶碱的吸光度并取其差值？

12． 试述药物动力学参数K、Vd、t1/2、Cl、AUC的含义。

13． 与血药浓度法相比用尿药数据法计算动力学参数和生物利用度，有何优缺点?

14． 以尿药数据法计算生物利用度产生误差的主要原因是什么？