采用UPC2/MS/MS分离利培酮的活性对映体代谢物并用于检测代谢稳定性
沃特世
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背景
许多候选药物及其代谢物都含有一个或多个手性中心。识别和监测可能存在的各种对映体是药物开发过程中至关重要的一步。众所周知，超临界流体色谱（SFC）是一种可进行手性分离的高效技术。此外，SFC还具有许多优势，例如分析效率高、分离速度快，以及使用的溶剂与MS兼容等。
解决方案
在本技术简报中，我们展示了利用UPC2®/MS/MS对利培酮的活性代谢物9-羟基利培酮进行对映体分离和检测。研究人员使用9-羟基利培酮标准品进行方法优化，然后将其应用于在人肝脏微粒体中温育的利培酮样品。实验监测了从母体化合物到羟基代谢物的转化过程。
本方法被用于分析t在0、15、30、60、90和120 min时淬灭的温育样品，以监测从利培酮母体到9-羟基代谢物的转化过程。图2显示了一个示例进样，其中9-羟基代谢物的两个预期峰分别位于3.92和4.29 min处。然而，在4.48和4.76 min处还出现了另外两个峰，它们可能是文献报道的少量7-羟基利培酮代谢物。1
图1展示了采用沃特世（Waters®）Trefoil CEL2 3×150 mm，2.5 µm色谱柱，以甲酸铵改性的甲醇为共溶剂所获得的非手性利培酮及9-羟基利培酮的R和S构型的优化色谱图。
我们将所获得的母体化合物、利培酮以及四种羟基代谢物峰的峰面积对应时间函数绘制成图。如图3所示，多数母体化合物在30 min内转化为代谢物。虽然R和S构型无法得到绝对确证，但根据已发表的数据2显示，该过程更倾向于形成R-9-羟基利培酮。因此，我们推测较早洗脱出的峰为R构型，而第二个峰为S构型。
总结
UPC2与MS检测的结合有利于利培酮的活性代谢物9-羟基利培酮的对映体分离。分离化合物的不同手性构型是药物开发过程中至关重要的步骤。此外，我们还证明了合相色谱可成功应用于代谢稳定性研究。
参考文献
1. G Mannens, ML Huang, W Meuldermans, J Hendirckx, R Woestenborghs, J Heykants. Absorption, metabolism, and excretion of risperidone in humans.Drug Metab Dispos 21: 1134-1141, 1993.
2. N Yasui-Furukori, M Hidestrand, E Spina, G Facciola, MG Scordo, G Tybring. Different Enantioselective 9-Hydroxylation of Risperidone by the Two Human CYP2D6 and CYP3A4 Enzymes. Drug Metab Dispos 29: 1263-1268, 2001.
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许多候选药物及其代谢物都含有一个或多个手性中心。识别和监测可能存在的各种对映体是药物开发过程中至关重要的一步。众所周知，超临界流体色谱（SFC）是一种可进行手性分离的高效技术。此外，SFC还具有许多优势，例如分析效率高、分离速度快，以及使用的溶剂与MS兼容等。
解决方案
在本技术简报中，我们展示了利用UPC2®/MS/MS对利培酮的活性代谢物9-羟基利培酮进行对映体分离和检测。研究人员使用9-羟基利培酮标准品进行方法优化，然后将其应用于在人肝脏微粒体中温育的利培酮样品。实验监测了从母体化合物到羟基代谢物的转化过程。
本方法被用于分析t在0、15、30、60、90和120 min时淬灭的温育样品，以监测从利培酮母体到9-羟基代谢物的转化过程。图2显示了一个示例进样，其中9-羟基代谢物的两个预期峰分别位于3.92和4.29 min处。然而，在4.48和4.76 min处还出现了另外两个峰，它们可能是文献报道的少量7-羟基利培酮代谢物。1
图1. 利培酮（上）和R/S 9-羟基利培酮（下）。
图1展示了采用沃特世（Waters®）Trefoil CEL2 3×150 mm，2.5 µm色谱柱，以甲酸铵改性的甲醇为共溶剂所获得的非手性利培酮及9-羟基利培酮的R和S构型的优化色谱图。
图2. 经利培酮微粒体温育的利培酮（上） 和羟基利培酮（下）在t = 120处的分析结果。
我们将所获得的母体化合物、利培酮以及四种羟基代谢物峰的峰面积对应时间函数绘制成图。如图3所示，多数母体化合物在30 min内转化为代谢物。虽然R和S构型无法得到绝对确证，但根据已发表的数据2显示，该过程更倾向于形成R-9-羟基利培酮。因此，我们推测较早洗脱出的峰为R构型，而第二个峰为S构型。
图3. 分别在15、30、60、90和120min后淬灭的温育母体化合物（利培酮）与羟基代谢物的测得峰面积-时间曲线图。
总结
UPC2与MS检测的结合有利于利培酮的活性代谢物9-羟基利培酮的对映体分离。分离化合物的不同手性构型是药物开发过程中至关重要的步骤。此外，我们还证明了合相色谱可成功应用于代谢稳定性研究。
参考文献
1. G Mannens, ML Huang, W Meuldermans, J Hendirckx, R Woestenborghs, J Heykants. Absorption, metabolism, and excretion of risperidone in humans.Drug Metab Dispos 21: 1134-1141, 1993.
2. N Yasui-Furukori, M Hidestrand, E Spina, G Facciola, MG Scordo, G Tybring. Different Enantioselective 9-Hydroxylation of Risperidone by the Two Human CYP2D6 and CYP3A4 Enzymes. Drug Metab Dispos 29: 1263-1268, 2001.
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