酶活性测定样品的贮存与处理

如果在测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低，无论所用的仪器如何先进，也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活，因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性，最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与处理应注意以下几点：

1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性，如EDTA能抑制ALP，草酸盐抑制LDH，肝素对CK及某些其他酶有轻微的抑制作用，故一般样品以血清为佳。

2.多数血清酶以较高浓度存在于红细胞、白细胞或血小板中。因此分离血清时应注意避免溶血。

3.光照对CK活性有抑制作用，因此，主张CK测定的血清应贮存于4℃的暗处，测定时应该注意避光。

4.由于血清白蛋白对酶蛋白有稳定作用，在它的存在下，某些酶在室温下可保存1～2天而无明显失活。

5.有些酶由于自身的特性，在贮存时需特别加以注意。例如LDH同工酶在冰箱保存不稳定，在室温反而稳定时间较长，所以测定LDH活力的血清样品，应置于室温下，2～3天内可保持稳定，不能存放冰箱过夜。

6.由于酶很容易发生表面变性，因此在操作时应避免形成泡沫。

7.巯基对于大多数酶来说是十分重要的，可能起如下几方面的作用：①参与催化；②和底物结合；③组成变构部位；④维持酶的三级或四级结构。因此，使巯基保持天然状态是使许多酶稳定化的最重要的条件之一，基于这个理由，在酶的活性测定、抽提、制备以及保存过程中，常可添加－SH保护剂，如半胱氨酸、谷胱甘肽、2－巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇等。