流行性乙型脑炎病毒危害评估报告
互联网
1535
一、危害程度分类
（一）分类等级
流行性乙型脑炎是经蚊虫媒介传播的一种人畜共患性疾病。1935年日本的学者从病死脑炎病人的脑组织中分离到该病毒，国际上，将这种病原体命名为日本脑炎病毒（Jpneseenephitisvirus,JEV）,简称“乙脑病毒”。我国称为“流行性乙型脑炎”，简称“乙脑”。根据《中华人民共和国传染病防治法》，流行性乙型脑炎属于乙类传染病。
根据2006年卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》，乙脑病毒属于危害程度第二类的病原微生物。运输包装为A类，UN编号：UN2814。
（二）不同实室操作生物安全实室级别要求
根据《名录》的要求，在实室操作可能含有和确定含有乙型脑炎病毒感染性材料或未经培养的感染性材料以及病毒培养、动物感染实，务必在BSL-2实室内进行；在对灭活、无感染性材料进行操作时，确认的乙脑病毒灭活措施有效后，方可进入BSL-1实室进行诸如ELISA，PCR等后续实测过程。
二、背景资料
（一）一般生物学特性
1、形态染色乙型脑炎病毒属于黄病毒科（Fvivirie）,黄病毒属（fvi-virus）。电镜下病毒颗粒大致呈球形，直径40~60n左右。超薄切片上可看到一层外膜（膜蛋白囊膜）和一个电子密集的核心（RNA蛋白），围绕成一个清晰的结构。负染色体可见一些明显的突起部分分布在外膜上，由32个子粒组成的衣壳呈明显的对称二十面体。病毒基因组为11k左右的单股、正链RNA。脂质双分子层中镶嵌有糖基化的包膜蛋白（E）和膜蛋白（M）。在脂蛋白囊膜表面有血凝素刺突，能凝集鸡、鹅、羊等动物红细胞。JEV抗原性稳定，人和动物感染JEV后，均产生补体结合抗体、中和抗体和血凝抑制抗体。
2、培养特性JEV能够感染多种细胞，C6/36、BHK21、Ver等细胞株和金黄色鼠肾、猪肾、狗肾、鸡胚等原代细胞均对乙型肝炎病毒敏感，并引起典型的细胞病变。较敏感的细胞包括金黄色鼠肾细胞，猪肾细胞。上述细胞感染乙型脑炎病毒后均能够大量繁殖扩增到增到较高的滴度，并引起明显的细胞病变，细胞病变表现为细胞圆缩，脱落：C6/36细胞上的病变可以表现为聚集、圆缩以及脱落等。在琼脂糖覆盖下，鸡胚、鼠肾、Ver等细胞均能形成蚀斑。本病毒的这一特性可用于减毒疫苗苗株的筛选。
乙型脑炎病毒有明显的嗜神经特性，接种小鼠、金黄色鼠、猴、马、绵羊、山羊等动物内均可引起典型的神经系统症状，乳鼠可经皮下接种而感染，小鼠是常用的实动物模型。能凝集多种动物血红细胞。病毒在细胞和鼠脑内连续传代，可使毒力下降。
（1）原代细胞：原代细胞较敏感。而常用的为黄金色鼠肾细胞（BHK-21）。培养环境：含EgLe’s液、胎牛血清、青霉素和链霉素（PS）、1%谷氨酰胺（G）的生长维持液；ph值至72~74；37℃5%CO2培养箱孵育。以小量病毒（10TCID50）感染后，病毒很快繁殖，24H开始出现病变，72H病变明显，病毒滴度可达107TCID50/以上。其他常用细胞有鸡胚纤维母细胞，常用于蚀斑培养。
（2）传代细胞：以白蚊伊蚊C6/36细胞为最敏感，培养环境：含EgLe’s液、1640培养液、胎牛血清、青霉素和链霉素（PS）、1%1%谷氨酰胺（G）的生长维持液；ph值至72~74。在28℃的5%CO2培养箱孵育。病毒反之滴度高达108TCID50/，但细胞病变不甚明显。BHK-21细胞可用于培养，也可适用于做蚀斑，此外，人二倍体细胞也可培养病毒。不同细胞的敏感性不同。
（一）分类等级
流行性乙型脑炎是经蚊虫媒介传播的一种人畜共患性疾病。1935年日本的学者从病死脑炎病人的脑组织中分离到该病毒，国际上，将这种病原体命名为日本脑炎病毒（Jpneseenephitisvirus,JEV）,简称“乙脑病毒”。我国称为“流行性乙型脑炎”，简称“乙脑”。根据《中华人民共和国传染病防治法》，流行性乙型脑炎属于乙类传染病。
根据2006年卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》，乙脑病毒属于危害程度第二类的病原微生物。运输包装为A类，UN编号：UN2814。
（二）不同实室操作生物安全实室级别要求
根据《名录》的要求，在实室操作可能含有和确定含有乙型脑炎病毒感染性材料或未经培养的感染性材料以及病毒培养、动物感染实，务必在BSL-2实室内进行；在对灭活、无感染性材料进行操作时，确认的乙脑病毒灭活措施有效后，方可进入BSL-1实室进行诸如ELISA，PCR等后续实测过程。
二、背景资料
（一）一般生物学特性
1、形态染色乙型脑炎病毒属于黄病毒科（Fvivirie）,黄病毒属（fvi-virus）。电镜下病毒颗粒大致呈球形，直径40~60n左右。超薄切片上可看到一层外膜（膜蛋白囊膜）和一个电子密集的核心（RNA蛋白），围绕成一个清晰的结构。负染色体可见一些明显的突起部分分布在外膜上，由32个子粒组成的衣壳呈明显的对称二十面体。病毒基因组为11k左右的单股、正链RNA。脂质双分子层中镶嵌有糖基化的包膜蛋白（E）和膜蛋白（M）。在脂蛋白囊膜表面有血凝素刺突，能凝集鸡、鹅、羊等动物红细胞。JEV抗原性稳定，人和动物感染JEV后，均产生补体结合抗体、中和抗体和血凝抑制抗体。
2、培养特性JEV能够感染多种细胞，C6/36、BHK21、Ver等细胞株和金黄色鼠肾、猪肾、狗肾、鸡胚等原代细胞均对乙型肝炎病毒敏感，并引起典型的细胞病变。较敏感的细胞包括金黄色鼠肾细胞，猪肾细胞。上述细胞感染乙型脑炎病毒后均能够大量繁殖扩增到增到较高的滴度，并引起明显的细胞病变，细胞病变表现为细胞圆缩，脱落：C6/36细胞上的病变可以表现为聚集、圆缩以及脱落等。在琼脂糖覆盖下，鸡胚、鼠肾、Ver等细胞均能形成蚀斑。本病毒的这一特性可用于减毒疫苗苗株的筛选。
乙型脑炎病毒有明显的嗜神经特性，接种小鼠、金黄色鼠、猴、马、绵羊、山羊等动物内均可引起典型的神经系统症状，乳鼠可经皮下接种而感染，小鼠是常用的实动物模型。能凝集多种动物血红细胞。病毒在细胞和鼠脑内连续传代，可使毒力下降。
（1）原代细胞：原代细胞较敏感。而常用的为黄金色鼠肾细胞（BHK-21）。培养环境：含EgLe’s液、胎牛血清、青霉素和链霉素（PS）、1%谷氨酰胺（G）的生长维持液；ph值至72~74；37℃5%CO2培养箱孵育。以小量病毒（10TCID50）感染后，病毒很快繁殖，24H开始出现病变，72H病变明显，病毒滴度可达107TCID50/以上。其他常用细胞有鸡胚纤维母细胞，常用于蚀斑培养。
（2）传代细胞：以白蚊伊蚊C6/36细胞为最敏感，培养环境：含EgLe’s液、1640培养液、胎牛血清、青霉素和链霉素（PS）、1%1%谷氨酰胺（G）的生长维持液；ph值至72~74。在28℃的5%CO2培养箱孵育。病毒反之滴度高达108TCID50/，但细胞病变不甚明显。BHK-21细胞可用于培养，也可适用于做蚀斑，此外，人二倍体细胞也可培养病毒。不同细胞的敏感性不同。
