HIV初筛实验室筛查检验程序

1，筛查试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准，批批合格，在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。

2，筛查方法

（1），常用的筛查方法是酶联免疫试（ELISA）

目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主，国际上有些国家和区已将线性免疫酶测定（第四代ELISA试剂）用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，出时间提前了4～9。其优点在于能同时测抗原抗体，降低血源筛查的残余危险度。

（2），快速测（RT）及其它测

随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询测（VCT）的迫切需求，简便，快速的HIV测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种：

①，明胶颗粒凝集试（PA）：PA是HIV血清抗体测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFDHIV-1/2PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA）注册批准；HIV-1，HIV-2抗原分别致敏的PA试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。

②，斑点EIA或称斑点ELISA（t-EIA）：以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10in以内，使用抗原量少。

③，斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试：与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。试时不需任何设备，迅速，简便，特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急测，门诊急诊个体测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在10～30in内判读结果。

④，艾滋病唾液测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。主要测唾液中的HIVIgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA，免疫印迹法（WB）试剂已经美国FDA批准。

⑤，其它快速筛查试方法：家庭HIV测（HeAessSyste）等。

3，尿液HIV抗体测

1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂，我国也正在研制尿液HIV抗体测试剂。主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面积流行病学调查，监测。筛查阳性者仍需采血做确认试才能确定。

4，筛查试

根据测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复测（复）。

5，初筛试：以第三代ELISA（双抗原夹心法）为例。

（1）实准备：试开始前将试剂和样品放置在室温(18~23℃),按实室SOP做好试剂准备。

磷酸盐缓冲液：若液体内有结晶,应放置在37℃直至溶解，用蒸馏水1：25稀释浓缩液，4℃保存2周。

TMB底物液：使用前配制，TMB液和过氧化脲液等量混匀。

1M硫酸终止液：85蒸馏水中加入5浓硫酸。

备好试剂盒，待样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查测。