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HIV初筛实验室筛查检验程序

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1,筛查试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准,批批合格,在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。

2,筛查方法

(1),常用的筛查方法是酶联免疫试(ELISA)

目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂,少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主,国际上有些国家和区已将线性免疫酶测定(第四代ELISA试剂)用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂,可同时测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比,出时间提前了4~9。其优点在于能同时测抗原抗体,降低血源筛查的残余危险度。

(2),快速测(RT)及其它测

随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展,及对无症状HIV感染者提供自愿咨询测(VCT)的迫切需求,简便,快速的HIV测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种:

①,明胶颗粒凝集试(PA):PA是HIV血清抗体测的一种简便方法,是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待样品作用,混匀后保温(一般为室温)。当待样品含有HIV抗体时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种,HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂(AFDHIV-1/2PA),已经我国食品药品监督管理局(SFDA)注册批准;HIV-1,HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(SERODIA-HIV-1/2)可初步区分HIV-1型和HIV-2型,目前我国尚未引进。

②,斑点EIA或称斑点ELISA(t-EIA):以硝酸纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点状,即为固相抗原。加血清样品作用,以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10in以内,使用抗原量少。

③,斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试:与斑点EIA相似,也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体,而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白,用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定,可室温长期保存。试时不需任何设备,迅速,简便,特异性较好,敏感性约相当于中度敏感的ELISA,适用于应急测,门诊急诊个体测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在10~30in内判读结果。

④,艾滋病唾液测卡:在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原,可同时测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体,原理为酶免疫间接法。主要测唾液中的HIVIgA与IgG抗体,敏感性特异性与ELISA相近,可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA,免疫印迹法(WB)试剂已经美国FDA批准。

⑤,其它快速筛查试方法:家庭HIV测(HeAessSyste)等。

3,尿液HIV抗体测

1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂,我国也正在研制尿液HIV抗体测试剂。主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群和其它高危人群的大面积流行病学调查,监测。筛查阳性者仍需采血做确认试才能确定。

4,筛查试

根据测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复测(复)。

5,初筛试:以第三代ELISA(双抗原夹心法)为例。

(1)实准备:试开始前将试剂和样品放置在室温(18~23℃),按实室SOP做好试剂准备。

磷酸盐缓冲液:若液体内有结晶,应放置在37℃直至溶解,用蒸馏水1:25稀释浓缩液,4℃保存2周。

TMB底物液:使用前配制,TMB液和过氧化脲液等量混匀。

1M硫酸终止液:85蒸馏水中加入5浓硫酸。

备好试剂盒,待样品和外部对照质控血清后,按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查测。
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