抗血清的鉴定

动物血采集后，立即分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。

（一）双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性

按双向免疫扩散技术打两排孔，上排放抗原粗提物（如抗原来自动物血清则放相应的混合血清）和纯化抗原，下排加抗血清，进行双扩散18～24h后，仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若与粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线医学|教育网搜集整理，且两者互相融合，则证明该动物已产生单价特异性抗体；不出现沉淀线，表明示免疫成功。若与纯化抗原出现一条，而与粗抗原出现多条线，且其中一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，也是成功的免疫，待取血后将杂抗体吸收去除，可以成为单价特异性抗体。

（二）双向免疫扩散法则定抗血清效价

测定抗血清效价有两种稀释方法：一是稀释抗血清，如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释，分别与一个浓度的纯抗原反应；另一是稀释抗原，即把抗原作对倍稀释或按浓度（如mg/ml）进行稀释，分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验（称为棋盘滴定），见表10-1.

表10-1抗血清效价测定

 

抗原	抗血清
不稀释	1/2	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	1/128
不稀释	＋＋＋	＋＋＋	＋＋＋	＋＋	＋＋	＋	－	－
1/2	＋＋＋	＋＋＋	＋＋＋	＋＋	＋＋	＋	－	－
1/4	＋＋＋	＋＋＋	＋＋＋	＋＋	＋＋	＋	－	－
1/8	＋＋＋	＋＋	＋＋	＋＋	＋	＋	－	－
1/16	＋＋	＋＋	＋＋	＋	＋	＋	－	－
1/32	＋	＋	＋	＋	－	－	－	－
1/64	＋	＋	＋	＋	－	－	－	－

 

表中＋～＋＋＋代表出现沉淀线的浓度，如1：8抗体出现中等浓度沉淀线，与1：16、1：32则出现较弱的沉淀线。按表10-1的互为比例稀释后确定抗血清的效价为1：32，最佳抗原浓度为1：16.效价在1：8以上即可采用于一般试验医学|教育网搜集整理。

（三）其他鉴定方法

有时，因抗原特殊，沉淀线不易出现，特别是制备的抗血清将用于某种试验时，则考虑用其它方法（如血凝试验、抑制试验、中和试验、放射免疫技术等）测定其效价。