材料与仪器
血清 HBSS
瓶子 盖子 无菌过滤器 透析袋 大烧杯 本生灯 三脚架 量筒
瓶子 盖子 无菌过滤器 透析袋 大烧杯 本生灯 三脚架 量筒
步骤
1. 将30 mm × 500 mm 的五个透析袋煮沸,换三次蒸馏水。
2. 将透析袋转移到 Hanks’s 的平衡盐溶液中(HBSS)(HBSS 储存于4°C),冷却。
3. 在每个透析袋的一端打两个结。
4. 每个透析袋装一半的血清(需要透析的血清)(20 ml )。
5. 压入空气后将透析袋的另一端也打上结,在血清和结之间留出大约一半管子的空间。
6. 将透析袋放入 5 L 的HBSS 中,放到磁力搅拌器上搅拌,4°C 过夜。
7. 更换 HBSS,重复步骤6 两次。
8. 将血清收集到量筒中,并记录收集的量(如果少于开始时血清的量 , 则加人 HBSS 使其恢复到开始的量 。如果多于开始时血清的量,则随后加入培养基时要留出预留量 )。
9. 用一系列过滤器(无菌过滤器,0.1 μm 孔径;预过滤器:孔径大小为 5.0 μm 的玻璃纤维,1.2 μm、0.45 μm 和0.22 μm 的滤膜(如 Durapore,Millipore))对血清进行灭菌。
10. 将血清装瓶冷冻。
2. 将透析袋转移到 Hanks’s 的平衡盐溶液中(HBSS)(HBSS 储存于4°C),冷却。
3. 在每个透析袋的一端打两个结。
4. 每个透析袋装一半的血清(需要透析的血清)(20 ml )。
5. 压入空气后将透析袋的另一端也打上结,在血清和结之间留出大约一半管子的空间。
6. 将透析袋放入 5 L 的HBSS 中,放到磁力搅拌器上搅拌,4°C 过夜。
7. 更换 HBSS,重复步骤6 两次。
8. 将血清收集到量筒中,并记录收集的量(如果少于开始时血清的量 , 则加人 HBSS 使其恢复到开始的量 。如果多于开始时血清的量,则随后加入培养基时要留出预留量 )。
9. 用一系列过滤器(无菌过滤器,0.1 μm 孔径;预过滤器:孔径大小为 5.0 μm 的玻璃纤维,1.2 μm、0.45 μm 和0.22 μm 的滤膜(如 Durapore,Millipore))对血清进行灭菌。
10. 将血清装瓶冷冻。
来源:丁香实验