免疫细胞分离技术

淋巴细胞的分离

取肝素抗凝血1m1 加Hanks 液1m1 稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1 淋巴细胞分离液的试管内（注意勿与分离液混合，然后2000r/min 水平离心20min，管内分为4 层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞（图2—1）。用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks 液洗两次，每次2000r/min 离心10min，最后用RPMI l640 培养液将细胞配成2×106/m1 的细胞悬液备用。

T 细胞及B 细胞的分离

将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B 细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B 细胞，并用少量的RPMI l640 培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B 细胞。医学教育|网搜集整理尼龙柱（塑料管）的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。

CD4 及CD8 细胞的分离⑴CD4 细胞的分离：将一定量的T 细胞悬液通过一根SephDdexC—10 柱，然后用少量的RPMll640 培养洗涤，收获的细胞悬液约含85%的CD4 细胞。

CD8 细胞分离

用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG（浓度为10μg/m1）包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS 洗净。然后将已标记有抗CD8 单克隆抗体的T 细胞（细胞浓度为1×l07/m1）3m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用PBS 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 PBS 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。

单核巨噬细胞的分离

单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液（如实物动物的腹腔液）加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃ C02 温箱内温育1 小时，然后用RPMI 1640 培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。