生物素-亲合素系统-检验技士考试辅导
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活性
链霉亲和素(streptavidin,SA)是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质,分子量为65kD.链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成,其氨基酸组成中,甘氨酸和丙氨酸的含量较大,而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基;链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质,并且不带任何糖基。
链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素,因此与亲和素一样,一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子,二者亲和常数(K)亦为1015L/mol.在蛋白水解酶作用下,链霉亲和素可在N端10~12和C端19-21间断裂,形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示,1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。
特点
生物素(biotin,B)广泛分布于动、植物组织中,常从含量较高的卵黄和肝组织中提取,分子量244. biotin 31Da.生物素分子有两个环状结构,其中Ⅰ环为咪唑酮环,是与亲和素结合的主要郎部位;II环为噻吩环,C2上有一戊酸侧链,其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构,经化学修饰后,生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。亲和素(avidin,AV)亦称抗生物素蛋白、卵白素,是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白,分子量为68kD,等电点pI=10.5;耐热井耐受多种蛋白水解酶的作用。尤其是与生物素结合后,稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素,二者之间的亲和力极强,亲和素常数(K)为1015L/mol,比抗原与抗体间的亲和力(K=10.5~11L/mol)至少高1万倍,因此二者的结合特异性高和稳定性好。亲和素以结合1μg生物素所需的量作为其活性单位,1mg链霉亲和素的最高活性可达18单位。
因此,BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究,亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。