戊型肝炎抗-IgM定性检测作业指导书

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1.检验目的
HEV所致戊型肝炎的临床症状和流行病学特点和甲型肝炎相似，是一种自限性急性肝炎。孕妇感染HEV有较高的重症肝炎发生率。抗HEV抗体检测所用抗原为合成多肽或克隆表达的融合蛋白，抗原序列多选自基因开放读码框架ORF2和ORF3区。抗HEV抗体IgM阳性表示急性期感染，在潜伏末、出现临床症状之前即可检测到，并在症状最典型期达到峰值，持续时间约1个月。抗HEV抗体IgM产生不久，即可检测到抗HEV抗体IgG，并紧随抗HEV抗体IgM之后达到峰值，持续约1年。对HEV感染的确诊还可结合其他相关手段，如酶免疫印迹技术、HEV RNA检测等。
2.方法原理
采用 ELISA架桥法：用抗人μ链抗体包被微孔板，以捕捉待测血清中IgM，再加HEV抗原（HEVAg）与特异性IgM反应，最后加酶抗HEV抗体，使底物呈色。
3.性能指标
此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4.标本收集
4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

 

4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管
4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。
5.分析系统
5.1分析仪器：为美国BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶标仪，仪器校准请参见仪器操作规程。
5.2分析试剂：为珠海丽珠集团提供的配套的HEV抗原试剂盒，规格为48test/盒，2-8℃贮存，有效期12个月；在效期内使用试剂。
5.3质控试剂：为珠海丽珠集团提供的配套的HEV抗原试剂盒中所附带的阴、阳性对照，2-8℃贮存，有效期12个月每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。
6.操作方法
6.1样品孔加入待测血清50μl。
6.2封板，置37℃孵育30分钟。
6.3手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。
6.4每孔加入酶标抗体1滴，置37℃孵育20分钟。
6.5手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。
6.6每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37℃ 孵育才10分钟。
6.7每孔加入1滴终止液终止显色反应。
6.7用酶标仪读数，数值取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。
7.质量控制操作程序
7.1每次实验设阴性、阳性各2孔，并设空白对照1孔随常规标本一起检测。
7.2质控结果登记到本年度的“免疫室定性检测项目室内质控登记表”。

 

7.3一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析详见8“失控处理”。
7.4每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。
8.失控处理操作程序
8.1失控情况处理：操作者在分析质控结果时，如发现质控违背了控制规则，应填写失控报告单，上交专业室主管（组长），由专业室主管（组长）做出是否发出或重测与质控品相关的该批次病人标本检验报告的决定。